Xenoinjerto tumoral derivado del paciente: una técnica para generar un modelo experimental de ratón para evaluar el carcinoma de células uroteliales

En este artículo

Resumen

Fuente: Moret, R. et al. Modelos de Xenoinjerto Ortotópico Derivados de Pacientes para el Carcinoma de Células Uroteliales Humanas y el Cáncer Colorrectal, Crecimiento Tumoral y Metástasis Espontánea. J. Vis. Exp. (2019)

Este video describe el procedimiento para generar un modelo murino experimental de xenoinjerto, que se puede utilizar para estudiar la progresión del carcinoma de células uroteliales.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Modelo de ratón UCC

Preparación de ratones para el procedimiento
1. Obtenga un ratón hembra NOD/SCID de 6 a 8 semanas de edad. Afeita la parte inferior de la espalda del ratón con crema depilatoria. Anestesiar al ratón en una cámara de inducción con isoflurano (2,5% en oxígeno al 100%, 1 L/min).
2. Una vez sedado, coloque al ratón en posición supina con el hocico en un cono nasal de isoflurano y a pelo firmemente conectado a tierra sobre un electrodo dispersivo.
  NOTA: El mouse está completamente sedado si no responde al pellizco de los dedos del pie.
Tome las células tumorales UCC recolectadas y vuelva a suspenderlas en un medio RPMI de 50 μL. Instilar las células UCC a la vejiga con un angiocatéter (Figura 1Aa, Ab).
1. Configure una máquina de electrocauterización monopolar y configúrela a una potencia de 4 W. Lubrique un angiocatéter estéril de 24 G con gelatina lubricante e insértelo a través de la uretra de la hembra de ratón.
  NOTA: Es posible que se sienta una ligera resistencia. Empuje suavemente hacia adelante o retire el angiocatéter y repita. Si el catéter se dobla al entrar, inserte un alambre guía estéril hasta la mitad del catéter para proporcionar estabilidad.
2. Inserte completamente el alambre guía recto de núcleo fijo de 0.025" 1 mm más allá del extremo del angiocatéter.
  NOTA: El alambre se marca con cinta adhesiva antes del procedimiento para indicar el punto de parada de 1 mm y garantizar la consistencia.
3. Sostenga el pin monopolar a la guía durante 1 s, lo que permite la irritación eléctrica de la mucosa de la vejiga.
4. Conecte un angiocatéter estéril nuevo a una jeringa Luer-Lok de 1 cc y extraiga 200 μL de las células recogidas.
  NOTA: Se pierden al menos 100 μL desde el angiocatéter hasta la jeringa. Compense el volumen de pérdida al calcular el volumen de suspensión celular necesario.
5. Retire el alambre guía y el angiocatéter de la uretra del ratón. Inserte un angiocatéter con una jeringa de células conectada a la uretra.
  NOTA: El avance debería ser más fácil que antes.
6. Instilar 50 μL de células en la vejiga del ratón. Espere unos segundos antes de retirar el angiocatéter para permitir que las células se adhieran a la pared de la vejiga.
  NOTA: Las células permanecen en la vejiga y se convierten en un tumor primario.

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Resultados

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Figura 1: Modelos ortotópicos de ratón UCC. (A bis) Se insertó un angiocatéter en la vejiga de una hembra de ratón NOD/SCID y se aplicó un choque electrocauterizado a la pared de la vejiga a través de una guía. (Ab) Las células tumorales UCC marcadas con luciferasa, BlCaPt15 (2 x 10⁴ células) o BlCaPt37 (5 x 10⁵ células) con la adición de 3 x 10...