Preparación de riñón de rata descelularizado: un procedimiento para generar andamio de órgano completo vascularizado acelular a partir de un riñón de rata cosechado

Resumen

Fuente: Kim, E. H. et al. Preparación de andamios renales descelularizados en ratas. J. Vis. Exp. (2021)

Este video describe la preparación de un riñón de rata descelularizado. El andamio vascular acelular obtenido puede servir como una plataforma prometedora para la ingeniería de tejidos de injertos de órganos.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Extracción y descelularización del riñón

1. Extracción del riñón izquierdo con la aorta abdominal y la vena cava inferior.
2. Ligue el uréter, la aorta torácica, la vena cava superior y las ramas de la aorta abdominal.
3. Mantenga el órgano hidratado en PBS de Dulbecco (DPBS) en una placa de Petri de 10 cm.
4. Cánula de la aorta abdominal y la vena cava inferior con un catéter de 23G. Para eliminar la sangre residual, conecte la cánula con una bomba peristáltica y lave con DPBS (500 mL) y heparina 16 U/mL durante 90 min a una velocidad de 5 rpm a 37 °C.
5. Para descelularizar el riñón, perfundir el riñón con Triton X-100 al 1% (1 L) durante 3 h y luego con una solución de dodecil sulfato de sodio (SDS) al 0,75% (2 L) durante 6 h a una presión constante de 40 mmHg.
   nota: El riñón se volverá transparente después de 8 h.
6. Para eliminar la SDS residual, perfundir la muestra con penicilina al 1% en agua destilada (6 L) durante 18 h (durante la noche) y luego con DPBS estéril (500 mL) y 16 U/mL de heparina durante 90 min.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubo de polietileno 50, tubo de catéter de 100 pies	Braintree Científico	.023" × .038"
3-0 Bobina de seda Acceso vascular / Ligadura en rata	Braintree Científico	SUT-S 110
Tijeras finas para cortar la fascia/tejido conectivo	Herramientas de Bellas Ciencias	14058-09
Aguja guía de 25 pulgadas de calibre (para catéteres vasculares)	Becton Dickinson	305145
Pinzas vasculares Schwartz microserrefine	Herramientas de Bellas Ciencias	18052-01 (recto)
5-0 Carrete de seda Acceso vascular / Ligadura en ratón	Braintree Científico	SUT-S 106