Modelo de organoide tumoral vesical: un método para el trasplante ortotópico de organoides vesicales en vejiga murina receptora

Resumen

Fuente: Kim, Y. et al. Cultivo, manipulación y trasplante ortotópico de organoides tumorales de vejiga de ratón.J. Vis. Exp.(2020)

En este video, describimos el trasplante ortotópico de organoides de tumores de vejiga cultivados a la vejiga murina para estudiar el papel del entorno de los órganos en el desarrollo de tumores.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

>1. Subcultivo de organoides tumorales de vejiga
 

NOTA: Se recomienda el paso de organoides tumorales de vejiga cuando alcancen 100-150 μm de diámetro.

1. Añadir 500 μL de colagenasa/dispasa al medio organoide en una placa de 24 pocillos con organoides tumorales. Pipetear hacia arriba y hacia abajo la matriz de la membrana basal y el medio. Incubar durante 20 min a 37 °C y recolectar las célula....

Resultados

Figura 1: Trasplante ortotópico de organoides tumorales vesicales.(A) Diagrama esquemático del trasplante ortotópico de organoides tumorales de vejiga a un ratón desnudo. (B) Imágenes representativas de vejigas y secciones teñidas con H&E de ratones trasplantados ortotópicamente con organoides tumorales de vejiga. En los paneles de la izquierda s.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubo cónico de 15 mL	Spl	50015
Placa de 24 pocillos	Corning	3526
Jeringa de insulina de 29 G 1/2	shina	B299473538
Tubo cónico de 50 mL	Spl	50050
A8301	Tocris	Año 2939	Concentración de stock: 25 mM
Etanol absoluto	Daejung	4023-2304
Sutura reabsorbible	Henry Schein	039010
DMEM/F-12 avanzado	termo	12634028
CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl (ratón desnudo)	Río Charles	Artículo 194
Colagenasa tipo I	termo	17100017	Concentración de existencias: 20 mg/mL
Colagenasa tipo II	termo	17100015	Concentración de existencias: 20 mg/mL
Colagenasa/dispasa	sigma	10269638001	Concentración de stock: 1 mg/mL
DMEM (Medios esenciales mínimos modificados de Dulbecco)	Gibco	11965-118
DMSO (dimetilsulfóxido)	sigma	D8418
DPBS (solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco)	Welgene	LB 001-02
Matrigel factor de crecimiento reducido (GFR) factor de crecimiento reducido (GFR)	Corning	354230	Uso para el cultivo de organoides en placa
Matrigel de alta concentración (HC)	Corning	354248	Uso para el trasplante de organoides
Microtubo de 1,5 mL	Axygen	MCT-150-C
cuchilla
Tampón salino	JW Farmacéutica
Tripsina-EDTA (0,25%)	Gibco	25200072
Tubo de ultracentrifugación	Beckman Coulter	331372
Y-27632 diclorhidrato	Abmole	M1817	Concentración de stock: 10 mM