Preparación de bloques de esferoides cancerosos por congelación instantánea: un procedimiento para preservar esferoides cancerosos en bloques de matriz congelada

Resumen

Fuente: Wang, Y. et al. 3-D Sistema de cultivo celular para estudiar la invasión y evaluar la terapéutica en el cáncer de vejiga. J. Vis. Exp. (2018)

Este video muestra la preparación de bloques de esferoides cancerosos mediante congelación instantánea, una técnica en la que una muestra de tejido de interés se congela a una temperatura ultrafría, restringiendo los esferoides dentro de la matriz.

Protocolo

1. Preparación de un bloque de muestra que contiene esferoides cancerosos para el corte de tejido congelado

1. Levante con cuidado el bloque de gel de colágeno y esferoides de los portaobjetos de la cámara con pinzas pequeñas. Coloque el bloque de gel de colágeno en un molde de plástico para histología.
2. Enjuague brevemente el gel de colágeno con 1x PBS y luego fíjelo con paraformaldehído (PFA) al 4% en PBS durante 30 minutos a temperatura ambiente.
   nota: El PFA es un carcinógeno potencial y debe manipularse con cuidado.
3. Lave el gel de colágeno con 1,5 mL de 1x PBS en una coctelera durante 15 min. Reemplace el PBS y repita el paso de lavado anterior 3 veces.
4. Aplique una capa delgada (aproximadamente 3 mm) de compuesto de temperatura óptima de corte (OCT) para cubrir el fondo de un nuevo molde de histología de plástico. Coloque el gel de colágeno fijo y lavado encima del compuesto OCT, luego incruste con cuidado todo el gel llenando el molde con compuesto OCT evitando la formación de burbujas de aire en el OCT.
5. Dejar el molde a 4 °C durante 1 h.
6. Coloque el molde que contiene la muestra y el compuesto OCT en una placa de Petri de 100 mm que flota sobre nitrógeno líquido. Deje que la muestra se congele por completo.
7. Almacene el bloque de muestra congelado a -80 °C para su uso futuro.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Medio de cultivo celular DMEM	Thermo Fisher Scientific	11995065
Suero fetal bovino	Thermo Fisher Scientific	26140079
Antibiótico-Antimicótico (100x)	Thermo Fisher Scientific	15240062
Albúmina sérica bovina (BSA)	Sigma-Aldrich	A3803
Solución salina tamponada con fosfato (PBS), pH 7.4	Thermo Fisher Scientific	10010023
Colágeno tipo 1 de cola de rata, high concentración	Corning	354249
Nunc Lab-Tek II Chambered Cubierta de vidrio	Thermo Fisher Scientific	155382
Solución de paraformaldehído	Ciencias de la Microscopía Electrónica	15710
Compuesto O.C.T	Thermo Fisher Scientific	23730571