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Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Animal anestesiante
- Utilice un sistema de anestesia de mesa para anestesiar al animal con isoflurano. Encienda el tanque de O2 y ajuste el caudalímetro de oxígeno a 1 L/min.
- Coloque un ratón hembra C57BL/6J adulto en la cámara de inducción. Encienda y ajuste el vaporizador de isoflurano al 3% para la inducción. El ratón debe estar bajo anestesia dentro de los 2 min. Administrar buprenorfina analgésico (0,1 mg/kg) por vía subcutánea después de retirar el ratón de la cámara de inducción para la analgesia preventiva.
nota: En este protocolo, se utilizan ratones hembra, ya que son más fáciles de trabajar durante el cateterismo uretral. El protocolo también funciona para ratones machos, pero se necesita precaución adicional.
- Aplicar pomada oftálmica en los ojos del animal para prevenir la sequedad. Coloque el ratón anestesiado boca arriba sobre una almohadilla térmica con la nariz en el cono de la nariz. Gire el interruptor del circuito de aire para permitir que el isoflurano pase a través del cono de la nariz.
- Sujete la cabeza y el cono de la nariz con cinta adhesiva. Ajuste el vaporizador de isoflurano al 2% para su mantenimiento.
- Sujete las extremidades con cinta adhesiva. Realice pruebas de pellizco de los dedos de los pies para asegurarse de que el animal esté bajo anestesia profunda y luego afeite el área abdominal.
>2. Depleción de orina y enjuague de la vejiga
- Aplique lubricante al catéter (24 G, longitud de 2,11 cm, diámetro exterior de 0,045 cm) y asegúrese de que su superficie exterior esté completamente cubierta.
- Inserte el catéter en la abertura de la uretra y empújelo lentamente hasta que llegue a la vejiga, momento en el que la orina debe fluir a través del catéter. Presione suavemente el abdomen para ayudar a la depleción de la orina.
- Compruebe si el catéter está insertado correctamente en la vejiga observando la salida automática de la orina. Evite perforar la uretra y la pared de la vejiga y aplique lubricante varias veces si es necesario.
- Deseche la orina con una pipeta en un vaso de precipitados.
- Pipetear 80 μL de solución salina tamponada con fosfato (PBS) en el extremo exterior del catéter, con el otro extremo aún en la vejiga. Coloque con cuidado una jeringa de 1 mL en el catéter. Empuje suavemente la jeringa para inyectar el PBS en la vejiga. Deje un poco de PBS en el catéter para evitar la formación de burbujas de aire en la vejiga.
- Retire la jeringa. Espere a que el PBS drene de la vejiga. Presione suavemente el abdomen para evacuar el PBS.
- Deseche el PBS en el catéter con una pipeta en el vaso de precipitados de desechos.
- Repita el lavado con PBS (pasos 2.4 a 2.6) dos veces más.
nota: Es esencial trabajar con cuidado durante estos pasos de lavado. La sangre en el catéter o la falla en la salida automática de líquido generalmente indican que la uretra está perforada