Criopreservación de cerebro murino por congelación instantánea: una técnica para congelar rápidamente muestras enteras de cerebro de ratón para análisis histológico

Resumen

Fuente: Comba, A. et al. Microdisección de captura láser de subregiones de glioma para la caracterización espacial y molecular de la heterogeneidad intratumoral, oncostreams e invasión. J. Vis. Exp. (2020)

Este video muestra la criopreservación del cerebro de un ratón para aislar áreas anatómicas discretas o poblaciones celulares específicas de los tejidos tumorales. Esta técnica es fundamental para obtener una resolución óptica óptima de la morfología del tejido cerebral para su posterior análisis.

Protocolo

>1. Criopreservación de cerebros que albergan tumores de glioma

1. Antes de criopreservar el cerebro, prepare un frasco lleno de isopentano/2-metilbutano frío y colóquelo en un recipiente lleno de nitrógeno líquido. Deja que el solvente se enfríe.
2. Retira el cerebro de la solución de sacarosa al 30% y sécalo con un papel de filtro.
3. Etiquete el crimolde con un marcador permanente. Agregue con cuidado aproximadamente 5 mL de OCT (compuesto de temperatura óptima de corte) en el centro del crimolde evitando burbujas de aire.
4. Coloque el cerebro en un criommould que contenga OCT en la orientación deseada. Llene el molde con OCT hasta que el cerebro esté completamente sumergido. Con pinzas limpias, coloque rápidamente el criomold con OCT y el cerebro en el isopentano/2-metilbutano frío.
5. Una vez que la OCT se solidifique (~30-40 s), retire el criomold con el cerebro y colóquelo en hielo seco. No deje el molde que contiene el cerebro en 2-metilbutano después de 2 minutos, ya que esto puede causar grietas en la OCT sólida. Envuelva el criomold con el cerebro en papel de aluminio y guárdelo a -80 °C.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Despegue los moldes de inclusión desechables	Ciencias de la Microscopía Electrónica	70182
Criostato de investigación	Leica	CM3050s
Compuesto Tissue-Plus O.C.T.	Fisher Científico	23-730-571