Reconocimiento de marcadores CD de células asesinas inducidas por citocinas humanas mediante citometría de flujo

Resumen

Fuente: Hsiao, C. H., et al. Aislamiento y expansión de linfocitos T asesinos inducidos por citocinas citotóxicas para el tratamiento del cáncer. J. Vis. Exp. (2020)

En este video, demostramos una técnica basada en citometría de flujo para determinar la proporción de células T asesinas inducidas por citocinas, células CIK, expandidas a partir de un cultivo de células mononucleares de sangre periférica.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran participantes humanos se han realizado de acuerdo con las directrices institucionales, nacionales e internacionales para el bienestar humano y han sido revisados por la junta de revisión institucional local.

1. Inducción y expansión de CIK

1. El día 0, cultive las PBMC (1 x 10⁶) en medio basal fresco que contenga 1.000 UI/mL de IFN-γ durante 24 h en una incubadora de cultivo celular humidificada a 37 °C y 5% de CO₂.
2. El día 1, refresque el medio con medio basal fresco que contenga 50 ng/mL de anticuerpo anti-CD3, 1 ng/mL de IL-1α rh y 1,000 U/mL....

Resultados

Figura 1: Proporción de linfocitos T CD3⁺CD56⁺ de una muestra representativa de PBMC.(A) Los linfocitos se reconocieron por tamaño y granularidad específicos. Población de células individuales seleccionada para análisis por citometría de flujo. (B) El análisis estadístico de la eficacia de la expansión de CIK de tres donantes sanos se realizó mediante una prueba t (*, p < 0,.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Anticuerpo CD56 antihumano para ratones APC	Bd	555518	B159
Ratón APC IgG1, control de isotipo κ	Bd	555751	MOPC-21
BD FACSCanto II Citómetro de flujo	Bd	338962	SN: R33896202856
Águila Modificada de Dulbecco Mediana/F12	HyClone	SH30023.02	Medio basal para el cultivo de células OC-3
Suero fetal bovino	HyClone	SH30084.03	Para cultivo celular K562 y OC-3. El medio completo contiene un 10% de FBS
Ficoll-Paque Plus	GE Healthcare Ciencias de la Vida	71101700-EK	Solución de gradiente de densidad
FITC Anticuerpo CD3 antihumano para ratones	Bd	555332	UCHT1
FITC Ratón IgG1, κ Control de Isotipo	Bd	555748	MOPC-21
AcM anti-CD3 humano	Takara	T210	OKT3 Añadir 2,5 mL de caldo (1 mg/1 mL) a 50 mL de medio de inducción. Stock de almacenamiento a -80 °C
RPMI1640 medio	Gibco	11875-085	Medio basal para cultivo celular K562. Stock de almacenamiento a 4 °C