Un método de disección para recolectar ganglios linfáticos de drenaje poplíteo murino para obtener imágenes ex vivo

Resumen

Fuente: Rezende, R. M., et al. Visualización de la estructura de los ganglios linfáticos y la localización celular mediante microscopía confocal ex-vivo. J. Vis. Exp. (2019)

Este video muestra una técnica de disección para recolectar ganglios linfáticos poplíteos drenantes de las patas traseras del ratón. Los ganglios linfáticos desempeñan un papel fundamental en la creación de puentes entre la inmunidad innata y la adaptativa, y la recolección de ganglios linfáticos intactos, con una estructura de tejido preservada y viabilidad celular, puede ayudar a estudiar las respuestas inmunitarias locales y sistémicas.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Procedimiento quirúrgico para extirpar el ganglio linfático poplíteo que drena

1. Eutanasia de ratones mediante asfixia con CO₂ seguida de luxación cervical.
2. Inmovilice a los ratones en posición prona sobre la plataforma acrílica con cinta adhesiva y aplique aceite mineral con un hisopo de algodón en la pantorrilla y la rodilla (Figura 1A-D).
3. Realice una incisión en la línea media de la pantorrilla desde el talón hasta la rodilla (Figura 1E, F).
4. Disociar la musculatura de la pantorrilla de la piel (Figura 1F, G).
5. Exponga la fosa poplítea (Figura 1G). El ganglio linfático poplíteo aparecerá como una esfera translúcida en la fosa poplítea.
6. Extirpar el ganglio linfático poplíteo mediante pinzas curvas de microcirugía (Figura 1G).
7. Alternativamente, gire el ratón en posición supina y acérquese a la fosa poplítea entre el bíceps femoral y el semitendinoso para la extirpación de la LN poplítea realizando una incisión en la línea media de la pantorrilla desde el talón hasta la rodilla, seguida de la disociación de la musculatura de la pantorrilla de la piel.
   nota: La fosa poplítea es una depresión poco profunda ubicada en la parte posterior de la articulación de la rodilla. Ábralo con cuidado para ver el ganglio linfático poplíteo.

Resultados

Figura 1: Preparación de los ganglios linfáticos poplíteos. (A, B) Inyección subcutánea de la mezcla maestra de anticuerpos FACS en la almohadilla de la pata. (C, D) 3 h después de la inyección, eutanasiar al ratón, inmovilizar al ratón en una placa acrílica con cinta adhesiva (C) y aplicar aceite mineral en la piel abdominal para evitar la deposición de pelo alrededor de la incisió...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Placa de cultivo Cellview	Greiner-Bio	627861	35x10 mm con fondo de cristal
Toallitas Kimwipes	Marca de Ciencia Kimtech	7557	Tamaño 21 x 20 cm / 100 hojas por caja
Pinza curva para microcirugía	Instrumentos quirúrgicos WEP	Hecho a medida	12,5 cm
Tijeras curvas para microcirugía	Instrumentos quirúrgicos WEP	Hecho a medida	11,5 cm