Síntesis in vitro de biofilm por Staphylococcus aureus

Resumen

Fuente: Rana, P. S. et al., Ensayos in vitro estandarizados para visualizar y cuantificar las interacciones entre neutrófilos humanos y las biopelículas de Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2022)

En este video, demostramos la preparación de biofilm in vitro por S. aureus en una placa multipocillos recubierta de poli-L-Lisina. La placa formada por biopelícula se puede utilizar para experimentos posteriores.

Protocolo

1. Preparación de biofilm in vitro

1. Obtener colonias aisladas de S. aureus a partir de una cepa criopreservada utilizando una técnica de placa de rayas en una placa de agar rica en nutrientes, como el agar de soja tríptico (ver Tabla de Materiales).
2. Cubra los pocillos individuales de una placa de 96 pocillos con 100 μL de poli-L-lisina (PLL) al 0,001% (v/v) diluido en H₂O estéril e incube a temperatura ambiente durante 30 min. Asépticamente, aspire la solución de PLL utilizando una trampa de aspiración asistida por vacío. Deje que los pozos se sequen durante la noche a temperatura ambi....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
BD Bacto Caldo de Soja Tríptico	Bd	DF0370-07-5	Combine con agar al 1,5% para hacer agar de soja tríptico
Placas de poliestireno de fondo plano de 96 pocillos con fondo transparente	Coprotagonista	3370
Solución salina equilibrada de Hanks (HBSS) 1x	Corning cellgro	21-022-CV	Sin calcio, magnesio y rojo fenol
Solución de poli-L-lisina	sigma	P4707-50ML
Placas blancas opacas de 96 pocillos	halcón	353296	Cultivo de tejidos tratado y placa de fondo plano
Medios esenciales mínimos (MEM) Alpha 1x	Gibco	41061-029