Una técnica in vitro para estimular linfocitos a través de bacterias patógenas

Resumen

Fuente: Dousha, L., et al. Evaluación de las respuestas inmunitarias respiratorias a Haemophilus influenzae. J. Vis. Exp. (2021)

Este video muestra una técnica in vitro para estimular linfocitos a través de Haemophilus influenzae (NTHi) no tipificable y para evaluar la respuesta inmune. La incubación de células mononucleares aisladas de sangre periférica (PBMC) con NTHi hace que las células bacterianas estimulen los linfocitos T, lo que conduce a la producción de citocinas. Al inhibir la secreción de citocinas, se realiza una tinción de inmunofluorescencia para detectar las citocinas intracelulares acumuladas en los linfocitos T estimulados.

Protocolo

1. Preparación antigénica

>NOTA: Se pueden utilizar tres preparaciones antigénicas diferentes para evaluar la respuesta inmunitaria al Hi. Estos son: 1) un componente subcelular (típicamente de la pared celular bacteriana); 2) bacterias muertas e inactivadas; y 3) bacterias vivas. Determinar el uso de cada preparación antigénica antes del inicio de cualquier experimento.

1. Componentes subcelulares
   1. Obtener componentes subcelulares de fuentes, incluyendo preparaciones comerciales, componentes desarrollados internamente y/o de otros investigadores.
      nota: Se pueden ....

Resultados

Figura 1: Producción de citocinas en el tejido pulmonar. En primer lugar, se analiza la expresión de las células del marcador leucocitario CD45 (A) mediante citometría de flujo. A continuación, se analiza más a fondo la expresión de CD3 (B) y la expresión de CD4/CD8 (C). Las células CD3/CD4+ se evalúan para la producción de citocinas intracelulares e.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Cloruro de amonio	Sigma Aldrich	213330
Brefeldin	Sigma Aldrich	B6542
CD28	Termopescador	16-0289-81
CD49d	Termopescador	534048
saponina	Sigma Aldrich	8047152