Una técnica de punción séptica para introducir una infección bacteriana sistémica en moscas

Resumen

Fuente: Khalil, S., et al. Infección bacteriana sistémica y fenotipos de defensa inmunitaria en Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2015)

Este video muestra una técnica para infectar Drosophila mediante la introducción de una bacteria patógena directamente en su cavidad corporal. Este método evita las barreras epiteliales y otros mecanismos de defensa pasiva, lo que permite la inducción de una infección sistémica. Tras la infección, la respuesta inmunitaria resultante se evalúa mediante el seguimiento de la mortalidad de la mosca y la realización de ensayos posteriores.

Protocolo

1. Recolectar y preparar moscas

1. Criar D. melanogaster en las condiciones experimentales deseadas. Tenga cuidado de no abarrotar las moscas durante la cría y asegúrese de que las densidades larvales sean consistentes en todos los tratamientos, ya que las condiciones ambientales durante la etapa larvaria pueden afectar profundamente los fenotipos de defensa inmune durante la etapa adulta.
2. Recoja las moscas experimentales de 0 a 3 días después de la eclosión de la caja de la pupa y transfiérelas a un medio fresco.
3. Aloje las moscas recolectadas a la temperatura deseada (generalmente son adecuadas temperaturas entre....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
incubadora	Poderes Científicos, Inc	DROS52SD
pincel
Comodillas de CO2	Cosas de mosca	59-114
CO2	Gases aéreos	CD FG50
Mezcla de cría de Drosophila
Botellas de fondo cuadrado de 6 oz, polipropileno	Genesee Científico	32-130
Bolas de algodón extra grandes Nosterile	Marca Fisher	22-456-882
microscopio	Corporación Olympus	SZ51
Drosophila Viales de poliestireno	VWR internacional	89092-720
Bolas de algodón grandes y nosteriales	Marca Fisher	22-456-883
Matraz de 2 litros	VWR internacional	89000-370
Placas de Petri con Tapas Transparentes, Cumbrera Elevada; 100 . x 15 mm;	VWR internacional	25384-302
LB Agar, Molinero	Difco	244520
Asa de inoculación	VWR internacional	80094-488
Pipetas Rainin Clasic en varios tamaños 0,1 μl a 2 μl, De 2 μl a 20 μl, De 20 μl a 200 μl, De 100 μl a 1000	Lluvia	PR-2 PR-20 PR-200 PR-1000
Puntas de micropipeta (tamaños variados)	VWR internacional	30128-376 53503-810 16466-008
Base de caldo Luria, molinero	Difco	241420
Tubos de cultivo desechables Vidrio de borosilicato	VWR internacional	47729-576
Agitador orbital S-500	VWR internacional	14005-830
centrífuga	VWR internacional	37001-300
PBS pH 7.4 10x	Invitrogen	70011044
Espectrofotómetro SmartSpec 3000	Bio-Rad	170-2501
Cubetas de semimicrovolumen	Bio-Rad	223-9955
fórceps	Herramientas de Bellas Ciencias	11255-20
Aceite mineral, blanco, ligero	Macron Química Fina	6358-10
Pines de minutos	Herramientas de Bellas Ciencias	26002-10
Tubos de microcentrífuga de 1,5 ml; Rito del sello	USA Scientific Inc.	1615-5500