Técnica para evaluar la respuesta inmunitaria frente a un antígeno mediante la inducción de inflamación de la piel

Resumen

Fuente: Yao, Y., et al. Intravital Imaging of Neutrophil Priming Using IL-1β Promoter-driven DsRed Reporter Mice. J. Vis. Exp. (2016).

Este vídeo muestra una técnica in vivo para evaluar un antígeno de prueba mediante la inducción de inflamación de la piel en un modelo murino. El antígeno de prueba, un hapteno en una solución de aceite y acetona, se aplica tópicamente en la piel de la oreja del ratón y se evalúa la inflamación de la piel después de un período adecuado.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Inducción de inflamación de la piel en ratones pIL1-DsRed

1. Anestesiar al ratón mediante inyección intraperitoneal (i.p.) de un cóctel anestésico que contiene 100 mg/kg de ketamina, 10 mg/kg de xilacina y 1 mg/kg de acepromazina. Los ratones adecuadamente anestesiados no muestran la retirada de las patas traseras al pellizco de los dedos de los pies.
2. Aplicar crema depilatoria en la superficie dorsal de ambas orejas del ratón. Espere de 30 segundos a 1 minuto. Limpie la superficie de la oreja con algodón humedecido en agua y deje secar al aire.
3. Mida el grosor de la oreja con un micrómetro y vuelva a colocar el mouse en una jaula separada. Observar hasta la recuperación de la anestesia (~ 15 - 30 min). Para resolver la inflamación de la piel inducida por el producto de depilación, deje que el ratón descanse durante 3 días antes de realizar más experimentos.
4. Prepare oxazolona (OX) al 1,25% (p/v) disolviendo 16,7 mg de OX en 1 ml de acetona y mezclando 750 μl de solución de OX/acetona con 250 μl de aceite de oliva. Prepare la solución del vehículo mezclando 750 μl de acetona con 250 μl de aceite de oliva.
5. Reanestesiar al ratón mediante inyección intraperitoneal (i.p.) de cóctel anestésico (1.1). Mida el grosor de la oreja como antes.
6. Aplicar 12,5 μl de OX al 1,25% en cada lado de la oreja derecha. Aplique 12,5 μl de solución vehicular de acetona/aceite de oliva en cada lado de la oreja izquierda.
7. Mantenga al ratón separado de sus compañeros de jaula hasta que se recupere por completo para evitar que otros ratones insulten sus oídos, luego reemplace al ratón en su jaula original y devuélvalo a la instalación de alojamiento >nota: La depilación puede provocar una inflamación leve de la piel seguida de un cambio en el grosor de la oreja. Esta pequeña inflamación se resolverá 3 días después, confirmada por el grosor normal de la oreja. Después de la aplicación tópica durante 24 horas, los oídos tratados con OX muestran una hinchazón significativa (p < 0,01) en comparación con los oídos tratados con solución de vehículo solo.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Clorhidrato de ketamina	Hospira	NDC 0409-2051-05
Xilacina	Laboratorio LLOYD	NADA #139-236
Acepromazina	Boehringer Ingelheim	ANADA 200-361
Crema depilatoria	La Iglesia y Dwight
acetona	Fisher Científico	A16P4
Oxazolona	Sigma-Aldrich	E0753