Generación de una herida cutánea por escisión en un modelo de ratón mediante biopsia por punción

Resumen

Fuente: Anderson, L. S. et al., Un modelo de ratón para evaluar la respuesta inmunitaria innata a la infección por Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2019)

Este video muestra un procedimiento de biopsia con sacabocados para crear una herida precisa en un modelo de ratón. La escisión expone la capa subcutánea de la piel, proporcionando un sitio adecuado para estudiar las respuestas inmunitarias a la infección por patógenos localizados.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Fuente y carcasa del ratón

1. Derivar ratones con proteína verde fluorescente mejorada con lisozima M (LysM-eGFP) en un fondo genético C57BL/6J como se describió anteriormente. Derivar ratones LysM-EGFP× la respuesta primaria de diferenciación mieloide 88 (MyD88)-/- cruzando ratones LysM-EGFP con ratones MyD88-/- en un fondo C57BL/6J.
2. Ratones domésticos en un vivero. Para estos estudios, los animales se alojaron en la Universidad de California, Davis, en grupos antes de la cirugía y se alojaron individualmente después de la cirugía. Utilice ratones de entre 10 y 16 semanas de edad.

>2. Heridas cutáneas por escisión

1. Administrar 100 μL de clorhidrato de buprenorfina (~0,2 mg/kg) a cada ratón mediante inyección intraperitoneal.
2. Veinte minutos después de la inyección, coloque de 2 a 4 ratones en una cámara con 2 a 3 litros por minuto (LPM) de oxígeno con 2-4% de isoflurano. Una vez que los ratones estén completamente anestesiados, transfiéralos uno a la vez a un cono de nariz conectado a 2-3 LPM de oxígeno con 2-4% de isoflurano. Verifica que los ratones estén completamente anestesiados pellizcando firmemente cada pata trasera entre el pulgar y el índice. Continúe con el siguiente paso si el animal no responde al pellizco.
3. Afeita una sección de 1 pulgada por 2 pulgadas en la parte posterior del mouse con una maquinilla eléctrica y despeja el área de recortes de piel con una toallita limpia o una gasa. Evite usar loción depilatoria porque puede causar un exceso de inflamación.
4. Limpie la parte posterior del ratón primero con una gasa empapada en povidona al 10% y luego con una gasa empapada en etanol al 70%. Limpie el área en forma de espiral, moviéndose hacia afuera desde el centro del área quirúrgica. Espere aproximadamente 1 minuto para que el área quirúrgica se seque antes de la cirugía.
5. Sostenga la parte posterior afeitada del ratón sin apretar entre dos dedos y presione firmemente una biopsia estéril con sacabocados de 6 mm en el centro del área quirúrgica preparada. No tire de la piel para tensarla.
   1. Retuerce la biopsia con sacabocados para crear un contorno circular en la piel que corte completamente la piel en al menos una sección del contorno. Tenga cuidado de no cortar la fascia o el tejido subyacente.
   2. Use tijeras y pinzas estériles para cortar la epidermis y la dermis siguiendo el patrón circular impreso por la biopsia con sacabocados.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Punzón de biopsia desechable de 6 mm	Integra Miltex	Años 33 a 36
Clorhidrato de buprenoprina inyectable	Suministro Médico del Oeste	7292	0,3 mg/mL
Ratones C57BL/6J	Labrador de Jackson	664
Ratones LysM-eGFP	Thomas Graff, Universidad Albert Einstein de Nueva York	Na
Ratones MyD88 KO	Labrador de Jackson	9088
Esponjas no tejidas	AMD- Ritmed Inc	A2101-CH	5 cm x 5 cm
Povidona yodada 10% Solución	Aplicare	697731