Un modelo de infección de heridas cutáneas murinas para estudiar la respuesta inmunitaria frente a un patógeno bacteriano

Resumen

Fuente: Anderson, L. S., et al. Un modelo de ratón para evaluar la respuesta inmunitaria innata a la infección por Staphylococcus aureus. J. Vis. Exp. (2019).

Este video muestra una técnica para generar un modelo murino de infección de heridas en la piel. Al infectar ratones, modificados genéticamente para expresar una proteína fluorescente en neutrófilos, con un Staphylococcus aureus bioluminiscente modificado genéticamente, una bacteria patógena. La carga bacteriana en el sitio de la infección y la dinámica de reclutamiento de neutrófilos se pueden estudiar utilizando imágenes de animales enteros.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Fuente y carcasa del ratón

1. Derivar ratones LysM-eGFP (proteína fluorescente verde mejorada (eGFP) insertada en la región promotora de Lysozyme M (LysM)) en un fondo genético C57BL/6J como se describió anteriormente. Derivar ratones LysM-EGFP×MyD88^-/- cruzando ratones LysM-EGFP con ratones MyD88^-/- (proteína 88 de respuesta primaria de diferenciación mieloide) en un fondo C57BL/6J.
2. Ratones domésticos en u....

Resultados

Figura 1: Correlación entre los recuentos de OD₆₀₀ y UFC para ALC2906. Se seleccionaron 3-4 ALC2906 colonias SH1000 de una placa de agar y se transfirieron a TSB con 10 μg/mL de cloranfenicol para cultivo nocturno. Al día siguiente, la suspensión se dividió 1:50 en TSB con 10 μg/mL de cloranfenicol y se cultivó. La densidad óptica a 600 nm (OD₆₀₀) se midió a intervalos regulares.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubo de polipropileno de fondo redondo de 14 mL	halcón	352059
Punzón de biopsia desechable de 6 mm	Integra Miltex	Años 33 a 36
S. aureus bioluminiscente	Lloyd Miller, Universidad Johns Hopkins	ALC 2906 SH1000
Agar sangre bovina, 5%, Hardy Diagnostics	VWR	10118-938
Clorhidrato de buprenoprina inyectable	Suministro Médico del Oeste	7292	0,3 mg/mL
Ratones C57BL/6J	Labrador de Jackson	664
Cloranfenicol (polvo cristalino)	Biorreactivos de Fisher	BP904-100
DPBS (1X)	Gibco	14190-144
Jeringas de insulina	Becton, Dickson y compañía	329461	.35 mm (28 G) x 12.7 mm (1/2'')
Sistema de imagen IVIS Spectrum in vivo	Perkin Elmer	124262
Software de imagen viva – Serie IVIS Spectrum	Perkin Elmer	128113
Ratones LysM-eGFP	Thomas Graff, Universidad Albert Einstein de Nueva York	Na
Espectrofotómetro de microvolumen	ThermoFisher Scientific	ND-2000
Ratones MyD88 KO	Labrador de Jackson	9088
Esponjas no tejidas	AMD- Ritmed Inc	A2101-CH	5 cm x 5 cm
Povidona yodada 10% Solución	Aplicare	697731
Caldo de soja tríptico	Becton, Dickson y compañía	211825