Un ensayo para estudiar el papel de la vitronectina en la adherencia bacteriana a las células epiteliales del huésped

Resumen

Fuente: Singh, B. et al., Ensayos para estudiar el papel de la vitronectina en la adhesión bacteriana y la resistencia sérica. J. Vis. Exp. (2018)

En este vídeo, demostramos un ensayo para estudiar el papel de la vitronectina en la adherencia de Haemophilus influenzae a las células epiteliales del huésped.

Protocolo

1. Estudio de la adherencia dependiente de Vn de las bacterias a las células epiteliales

1. Cultivo de células A549 (células epiteliales alveolares tipo II) en un matraz de cultivo de tejidos de 75^cm2 con medio F12 suplementado con suero fetal de ternero (FCS) al 10% (vol/vol) (medio completo) y gentamicina 5 μg/mL. Incubar el matraz en una incubadora con 5% de CO₂ a 37 °C durante 3 días hasta que el 80% confluente (la confluencia se puede estimar visualizando la cobertura de la superficie de las células utilizando un microscopio invertido). En los cuatro pasos siguientes se describe cómo preparar las células epiteliales....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubo de poliestireno de fondo redondo de 5 ml	Halcón BD	60819-138	Estilo de 12 × 75 mm
Incubadora suministrada con 5% deCO2	Termo Científico	BBD6220
Tubo de poliestireno de 6 ml de fondo redondo	VWR	89000-478	Estilo de 12 × 75 mm con tapa
Placas de 24 pocillos	Halcón BD	08-772-1H	Grado de cultivo celular
Matraz decultivo de tejidos de 75 cm 2	Halcón BD	BD353136	Ventilación
A549 Línea celular humana	Sigma-Aldrich	86012804-1VL
Enzima de desprendimiento celular (Accutase)	Sigma-Aldrich	A6964-500ML	Grado de cultivo celular
Albúminas séricas bovinas (BSA)	Sigma-Aldrich	A2058	Apto para el cultivo celular
F12 medio	Sigma-Aldrich	D6421	Grado de cultivo celular
Suero de ternera fetal (FCS)	Sigma-Aldrich	12003C	Apto para el cultivo celular
Hemotómetro	Marienfeld	640210
Matraz para cultivo de tejidos	Halcón BD	3175167	75 cm2
Vitronectina (Vn) a partir de plasma humano	Sigma-Aldrich	V8379-50UG	Grado de cultivo celular