Una técnica para generar un modelo de ratón de artritis inducida por adyuvantes

Resumen

Fuente: Lu, Q., et al. Detección de la migración e infiltración de neutrófilos en ratones. J. Vis. Exp. (2020).

Este video muestra un método para generar artritis inducida por adyuvantes en un modelo murino. El adyuvante completo de Freund (CFA) se inyecta en la articulación del tobillo y las áreas periarticulares del ratón. El CFA activa el sistema inmunitario, lo que provoca la infiltración de neutrófilos y una inflamación exagerada.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

>1. Inducción del modelo de ratón de artritis inducida por adyuvantes (AA)

1. Suspenda el adyuvante de Freund completo (CFA) mediante vórtice al menos 5 s, luego extraiga 100 μL de suspensión en un inyector de insulina.
   nota: Recomendamos utilizar un CFA completamente nuevo en los experimentos para garantizar la esterilidad.
2. Anestesiar a los ratones como se describe.
3. Marque la pata elegida e inyecte 20 μL de CFA en el espacio de la articulación del tobillo. Inyectar 20 μL de suspensión en cuatro puntos periarticulares de la pata elegida (80 μL en total).
4. Retire los ratones de la unidad de respiración y coloque los ratones procesados en una nueva cámara. Monitoree a los ratones para asegurarse de que estén respirando hasta que recuperen la capacidad de moverse.
5. Cada 3 días, evalúe el diámetro de la articulación midiendo el diámetro de la articulación del tobillo con un medidor de espesor de bolsillo (Figura 1A).
6. Cada 3 días, evalúe la gravedad de la artritis según el criterio de puntuación de la artritis (Figura 1C): 0, normal, sin evidencia de eritema e hinchazón; 1, la artritis más leve, eritema e hinchazón leve confinada a los tarsos o la articulación del tobillo; 2, artritis moderada, eritema e hinchazón leve que se extiende desde el tobillo hasta los tarsos; 3, artritis grave, eritema e hinchazón moderada que se extiende desde las articulaciones del tobillo hasta el metatarsiano; 4, La artritis, el eritema y la hinchazón más graves abarcan el tobillo, el pie y los dedos, o anquilosis de la extremidad.

Resultados

Figura 1: Resultados representativos del modelo de ratón de artritis inducida por adyuvantes (AA). (A) El diámetro de la articulación del tobillo se midió utilizando un medidor de espesor de bolsillo. (B) La hinchazón de la articulación se evaluó en función del diámetro de la articulación del tobillo (n = 7). (C) Imágenes de cada puntuación de artrit...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tubo centrífugo cónico de polipropileno de 15 mL	halcón	14-959-53A
Aguja de 23 G x 1 1/4"	Bd	305120
Aguja de 26 g x 3/8"	Bd	305110
Aguja de 30 g x 1/2"	Bd	305106
Adyuvante de Freund completo, 10 mg/ml	sigma	1002036152
Microtubos Eppendorf, 1,5 mL	sigma	Z606340
Medidor de espesor de dial	Mitutoyo	7301
Shu Rui U40 Aguja de inyección de insulina estéril desechable 1 mL	Bd	328421