Canulación del conducto linfático mesentérico en un modelo de rata para recolectar líquido linfático

Resumen

Fuente: Trevaskis, N. L., et al. El modelo de rata canulada del conducto linfático mesentérico: aplicación a la evaluación del transporte de fármacos linfáticos intestinales. J. Vis. Exp. (2015).

Este video muestra una técnica para canular el conducto linfático mesentérico en ratas. Este método permite el acceso directo a todo el volumen de componentes presentes en el líquido linfático.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Canulación del conducto linfático mesentérico

1. Coloque al animal con el lado derecho mirando hacia el operador. Realice la cirugía con o sin la ayuda de un microscopio quirúrgico según sea necesario.
2. Abra la capa superior de la pared muscular abdominal con una incisión recta de 4 cm que se extienda desde la línea media (apófisis xifoides) hasta el flanco derecho aproximadamente 2 cm por debajo de la caja torácica (margen costal) utilizando una hoja de bisturí estéril (véase la figura 1B).
3. Abra las capas restantes de la pared muscular abdominal desde 4 a 5 mm laterales hasta la línea media hasta el flanco derecho con un pequeño par de tijeras quirúrgicas (véase la figura 1B).
4. Retraiga el intestino delgado debajo de la pared muscular abdominal izquierda y manténgalo en su lugar con 2 a 3 piezas de gasa estéril saturada con solución salina normal.
5. Coloque un puente sobre la rata con una jeringa de plástico de 10 ml colocada horizontalmente debajo de la espalda de la rata a la altura del riñón derecho para facilitar la visualización del conducto linfático mesentérico.
6. Localice el conducto linfático mesentérico superior: un vaso de aproximadamente 0,5 a 1 mm de diámetro que es perpendicular al riñón derecho e inmediatamente rostral y paralelo a la arteria mesentérica (un vaso sanguíneo pulsante de color rojo oscuro; ver Figura 1C)
   NOTA: En ratas no ayunadas o predosificadas con aceite, el vaso es blanco, opaco y más fácil de visualizar que en ratas en ayunas, en las que es bastante translúcido.
7. Inspeccione el área inmediatamente caudal al conducto linfático mesentérico superior grande y a la arteria mesentérica para determinar si hay un segundo conducto linfático accesorio más pequeño. Si está presente, bloquee el flujo de linfa a través del conducto cortando el conducto y ocluyéndolo con superpegamento, o atando una sutura alrededor del conducto, para asegurarse de que todo el volumen de linfa que fluye desde el intestino se recoja del conducto linfático mesentérico superior.
8. Pase un par de pinzas rectas a través del lecho de grasa perirrenal en el margen inferior del riñón derecho y a través de las capas de tejido conectivo inmediatamente debajo de la vena cava, en una dirección paralela al conducto linfático mesentérico superior.
9. Con la punta de las pinzas, se agarra la cánula linfática y se tira de ella a través del lecho de grasa perirrenal, con un extremo inmediatamente adyacente al conducto linfático mesentérico y el otro exteriorizado del animal a la altura del riñón derecho.
10. Aísle el conducto linfático mesentérico de las capas suprayacentes de tejido conectivo y graso mediante disección roma. Tenga cuidado de no perforar o dañar el conducto linfático.
11. Después de aislar el conducto linfático, haz un pequeño orificio en el conducto linfático con unas microtijeras, la punta afilada de las pinzas de joyero o una aguja de 25 G. Tenga cuidado de no cortar completamente el recipiente.
12. Asegúrese de que la cánula linfática esté completamente llena con una solución anticoagulante (utilizando una jeringa y una aguja de 25 G) sin espacios de aire. Inserte la cánula linfática aproximadamente 2 a 4 mm dentro del conducto linfático mesentérico a través del pequeño orificio con la ayuda de un pequeño par de pinzas.
13. Observe la cánula linfática durante un par de minutos. Observe un flujo gradual de linfa intestinal desde el extremo de recolección libre de la cánula si la canulación es exitosa. Si la canulación no tiene éxito, repita los pasos 1.8 a 1.12.
14. Si la canulación es exitosa, asegure la cánula colocando una pequeña gota de adhesivo veterinario sobre el orificio de entrada al conducto linfático. Tenga cuidado de no ocluir el recipiente mediante la aplicación de un exceso de adhesivo veterinario.
15. Mientras espera que el adhesivo veterinario se asiente, observe el flujo de linfa durante varios minutos para asegurarse de que el procedimiento de canulación haya sido exitoso. Una vez asegurado el éxito de la canulación, retire con cuidado los trozos de gasa que estaban colocados en la cavidad abdominal y coloque el intestino delgado en su posición original.
16. Pesa previamente los tubos de recolección de linfa, etiqueta los tubos para la recolección de muestras de linfa y sangre y agrega una solución anticoagulante. Añadir suficiente solución anticoagulante para alcanzar una concentración final de 1 mg/ml de EDTA en agua estéril o de 10 a 20 UI/ml de heparina en la linfa o sangre recogida.
17. Coloque un tubo de recolección de linfa que contenga un anticoagulante (paso 1.16) en el extremo de la cánula para recolectar la linfa que fluye libremente.
18. A continuación, canular el duodeno para la infusión de soluciones de rehidratación y/o formulaciones.

Resultados

Figura 1. Fotografías de (A) el abdomen afeitado en preparación para canular el conducto linfático, (B) la pared del músculo abdominal abierta con una incisión recta de 4 cm que se extiende desde la línea media hasta el flanco derecho para acceder al conducto linfático, y (C) el conducto linfático mesentérico superior (en círculo amarillo) perpendicu...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Solución salina estéril	Cuidado de la salud de Baxter	AHB 1307	Se puede utilizar cualquier marca. Un ejemplo aquí son las bolsas de solución salina Baxter de 100 ml, caja de 50
70 % de etanol en agua	cualquier		Se puede utilizar cualquier marca
Solución de gluconato de clorhexidina (Microshield 4)	Livingstone Internacional	JJ60243L	Se puede utilizar cualquier marca. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =JJ60243L
Solución Betadine	Livingstone Internacional	BU0510	Se puede utilizar cualquier marca. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =BU0510
Ilium Ketamil (Ketamina 100 mg/ml)	PROVET VICTORIA	KETA I 1	http://www.provet.vom.au
Heparina (35000U.I. en 35 mL	SigmaProductos farmacéuticos	337220	http://www.sigmaco.com.au
Cánula de polietileno (PE) de 0,96 mm x 0,58 mm de diámetro interno	Extensiones de microtubos	PE8050	Se puede utilizar cualquier marca. Un ejemplo de ello es el tubo de PE de 0,96 x 0,58 mm, 30 m
Cánula de polietileno (PE) diámetro exterior 0,8 mm x diámetro interior: 0,5 mm	Extensiones de microtubos	PE9658	Se puede utilizar cualquier marca. Un ejemplo de ello es el tubo de PE de 0,8 x0,5 mm, 30 m
Marcadores	cualquier		Se puede utilizar cualquier marca
Adhesivo veterinario	cualquier		Se puede utilizar cualquier marca
Agujas de calibre 23	Livingstone Internacional	DN23GX0.75LV	Se puede utilizar cualquier marca. Un ejemplo aquí es Livingstone Aguja Desechable, Estéril, 23GX0.75inch, 100/BOX. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT= 6&search=DN23GX0.75LV
Agujas de calibre 25	Livingstone Internacional	DN25GX1.0LV	Se puede utilizar cualquier marca. Un ejemplo de ello es la Aguja Desechable Livingstone, Estéril, 25GX1.0inch, 100/BOX. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV
Jeringa de 1 ml	Livingstone Internacional	T3SS01TA	Se puede utilizar cualquier marca. Un ejemplo aquí es la jeringa Terumo 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&búsqueda =T3SS01TA
Jeringa de 10 ml	Livingstone Internacional	T3SS10SA	Se puede utilizar cualquier marca. Un ejemplo aquí es la jeringa Terumo 10 ml Slip 100/Box. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA
Hisopos de gasa	Livingstone Internacional	GSC075	Se puede usar cualquier marca y cortar al tamaño requerido. Un ejemplo aquí es el hisopo de gasa relleno de algodón de 7,5x7,5 cm, 8 capas. http:// www.livingstone.com.au/? PG=search_result&CAT=6&search =GSC075
Almohadilla térmica	Ratek	WT1	Se puede utilizar cualquier marca que mantenga la temperatura a 37 ° C. Un ejemplo de ello es la bandeja de calentamiento Ratek.
Microscopio quirúrgico	Zeiss	495005-0014-000	Se puede utilizar cualquier marca. Un ejemplo de ello es el microscopio estereoscópico Zeiss Stemi 2000-C con Stand S Double Spot y KL 300 LED. https:// www.micro-shop.zeiss.com/? l=en&p=us&f=e&i=10143
1 x Tijeras quirúrgicas pequeñas	Herramientas de Bellas Ciencias, (FST)	14060-09	Se puede utilizar cualquier marca. Un ejemplo aquí es FST Tijeras finas, de 9 cm con filo de 21 mm, afiladas, rectas. http://www.finescience.ca/ Páginas Especiales/Products.aspx? ProductId=40&CategoryId=17
2 x Pinzas con punta curva dentada	Herramientas de Bellas Ciencias, (FST)	11001-13	Se puede utilizar cualquier marca. Un ejemplo de ello es la pinza de patrón estándar FST de 13 cm con punta curvada de 2,8x1,4 mm. http://www.finescience.ca/ Páginas Especiales/Products.aspx? ProductId=405&CategoryId=32