Establecimiento de un modelo murino de cáncer de pulmón pleural diseminado

En este artículo

Resumen

Fuente: Yasui, H., et al. Fotoinmunoterapia de infrarrojo cercano para modelos de ratón de diseminación pleural. J. Vis. Exp. (2021)

Este video muestra un método para generar un modelo de ratón de diseminación pleural mediante la inyección de suspensión de células de cáncer de pulmón en la cavidad torácica de un ratón inmunodeficiente.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Generación de un modelo de diseminación pleural

Preparar las células diana que expresan luciferasa y suspender 1,0 × 10⁶ células diana en 100 μL de solución salina tamponada con fosfato (PBS)
nota: Las células cancerosas intratorácicas, como el cáncer de pulmón y el MPM, son adecuadas como células diana. Las células que expresan luciferasa se prepararon mediante transfección génica de luciferasa, y se confirmó la alta expresión de luciferasa después de > 10 pasajes celulares. Las células se cultivaron en un medio suplementado con penicilina sérica bovina fetal al 10% (100 UI/mL) y estreptomicina (100 mg/mL). El número de células se ajustó de acuerdo con la tasa de crecimiento tumoral y el tiempo de tratamiento (1,0. × 10 5-6,0 ×^{10 6} células/peso corporal).
Preparar ratones desnudos atímicos homocigotos femeninos de 8 a 12 semanas de edad, con un peso corporal preferible de 19 a 21 g.
Anestesiar a los ratones durante el procedimiento con isoflurano (introducción: 4-5%, mantenimiento 2-3%); presionar la cola con pinzas para confirmar que no hay reacción.
Haga un tapón con espuma de poliestireno y fije el tapón a la aguja de 30 G para que la punta quede a 5 mm para evitar lesiones pulmonares. Doble la punta de la aguja con pinzas limpias o presionándola contra un objeto duro limpiado con EtOH al 70% para evitar neumotórax (Figura 1).
cautela: Hay que tener cuidado de no perforarse. Use pinzas para doblar la aguja. No sujete el tapón cuando lo coloque en la aguja. Es más seguro pegar el tapón antes de llenar las células en la jeringa.
Llene una jeringa (1 ml) con células diana y coloque una aguja de 30 g con un tapón.
Desinfectar el pecho del animal con EtOH al 70% antes del procedimiento.
Perfora una aguja en el pecho del ratón a través del espacio intercostal. Debido a la resistencia al golpear contra las costillas en ese momento, la punta de la aguja se movía hacia arriba y hacia abajo. Después de pasar a través del espacio intercostal, presione la jeringa contra el ratón e inyecte 100 μL de células diana (Figura 2).
nota: El ratón respira profundamente cuando la aguja entra correctamente en la cavidad torácica. Con la flexión de la punta de la aguja, se podría evitar el neumotórax y la inyección inapropiada de células en el pulmón.
nota: Se recomienda la punción de la pared torácica derecha para evitar el riesgo de punción de la pared cardíaca.
Gire el ratón 2-3 veces para esparcir las células por toda la cavidad torácica.
Regrese el mouse a una jaula limpia y tibia y monitoree hasta que esté ambulatorio. Después del procedimiento, el ratón se despertará de la anestesia y se comportará normalmente.

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Resultados

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Figura 1: Dispositivo fácil de hacer a mano para el trasplante de células. Fije el tapón hecho con espuma de poliestireno a la aguja 30G para que la punta quede a 5 mm. La punta de la aguja debe estar doblada para evitar el neumotórax.

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Figura 2: Inyección de cé...