Tinción con fluoresceína en un modelo de rata autoinmune con ojo seco para examinar el daño corneal

Resumen

Fuente: Hou Ahiua, et al. Un modelo de rata de ojo seco autoinmune crónico con aumento de células T efectoras de memoria en el tejido del globo ocular. J.Vis. Exp. (2017)

Este video muestra la tinción de la córnea dañada utilizando tinte fluoresceína para evaluar el alcance de la enfermedad autoinmune del ojo seco en un modelo de rata. Las manchas verdes de fluorescencia de las fibras de colágeno teñidas indican células epiteliales corneales dañadas.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Evaluación de las características del ojo seco

Mida el daño corneal con tinción con fluoresceína.

1. Añadir 2 μL de fluoresceína al 0,2% en la córnea de rata. Abra y cierre pasivamente los párpados de rata 3 veces con un dedo enguantado para esparcir el tinte de fluoresceína en la superficie del ojo.
2. Después de 1 minuto, extraiga 1 ml de solución salina con una jeringa de 3 ml (sin ningún accesorio de aguja), coloque la jeringa unos 2-3 mm por delante de la córnea e impulse suavemente la solución salina sobre el ojo.
3. Adquiera imágenes bajo el filtro de azul cobalto (es decir, ~400 nm) de un microscopio de imágenes oculares con las luces de fondo apagadas.
   nota: Posteriormente, las imágenes se analizaron mediante un sistema de clasificación modificado de publicaciones anteriores. A continuación, las imágenes se analizaron clasificando subjetivamente el número, el área y la intensidad de las manchas verdes de 0 a 2, donde 0 indica su ausencia, 1 indica una tinción punteada de menos de 50 manchas y 2 indica una tinción puntiforme de más de 50 manchas.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Reactivo
Solución de fluoresceína sódica	Bausch & Lomb U.K. Limitada	Na
equipo
Microscopio estereoscópico con iluminador de luz anular y cámara	Carl Zeiss	Na