Inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón

Abstract

Fuente: Barthelmes, J. et al., Inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en ratones y evaluación de la distribución dependiente de la enfermedad de las células inmunitarias en varios tejidos.J. Vis. Exp.(2016)

El video demuestra la inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón mediante la inyección de una combinación de glicoproteínas de oligodendrocitos de mielina y Mycobacterium tuberculosis inactivada. El modelo permite a los investigadores estudiar los mecanismos de la enfermedad y probar intervenciones terapéuticas.

Protocol

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

>1. Encefalomielitis autoinmune experimental o modelo EAE

1. Inducción del modelo EAE
   1. Utilice ratones hembra 129S4/SvJae×C57BL/6 de 10 a 13 semanas de edad para la inducción de EAE.
   2. Administre a los ratones una inyección subcutánea, en la parte superior e inferior de la espalda, del péptido encefalitógeno MOG_{35 - 55} (glicoproteína de oligodendrocitos de mielina) (200 μg), emulsionado en 200 μl de adyuvante completo de Freund (CFA) que contiene 400 μg de Mycobacterium tuberculosis.
      nota: Como control simulado negativo, no inductor de enfermedad, se puede utilizar el adyuvante de Freund incompleto que contiene Mycobacterium tuberculosis, en el mismo volumen y por la misma vía.
   3. A continuación, y de nuevo 24 horas más tarde, administre a los ratones una inyección intraperitoneal de toxina de la tos ferina (en total 0,2 μg, diluido en 200 μl de solución salina tamponada con fosfato, PBS). Utilice ratones no tratados como grupo de control, para poder comparar los animales enfermos con los sanos.
      nota: También es posible inducir EAE con 200 - 300 μg de péptido MOG,_{35 - 55}, 300 - 500 μg de Mycobacterium tuberculosis en el CFA y 0,2 - 0,3 μg de toxina pertussis en un volumen de 0,1 - 0,2 ml por inyección.
   4. A partir de una semana después de la inyección, examine diariamente a los ratones para detectar síntomas clínicos (ver paso 1.2.1)
      nota: El día de inicio de la enfermedad varía en diferentes experimentos, pero bajo las condiciones de nuestro laboratorio, esto es alrededor del día 11 y, por lo tanto, aquí el día 14 se define como 3 días después del inicio de la enfermedad. Todos los ratones del presente estudio desarrollaron síntomas clínicos.

2. Puntuación de los ratones

1. Clasifique los síntomas clínicos según las puntuaciones clínicas de la siguiente manera: 0) ausencia de signos, 0.5) parálisis distal de la cola, 1) parálisis completa de la cola, 1.5) cola flácida y debilidad leve de las patas traseras, 2) cola flácida y debilidad severa de las patas traseras, 2.5) cola flácida y parálisis de una pata trasera, 3) cola flácida y parálisis de ambas patas traseras, 3.5) Parálisis de ambas extremidades traseras y debilidad de una extremidad anterior (los ratones que lograron esta puntuación fueron sacrificados, de acuerdo con las directrices éticas locales).

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Kit EAE	Laboratorios Hooke, Lawrence, Estados Unidos	EK2110