Ensayo bactericida en suero para la actividad bactericida mediada por el complemento de los anticuerpos

Abstract

Fuente: Weerts, H. P., et al. A High-throughput Shigella-specific Bactericid Assay. J. Vis. Exp. (2019).

Este video muestra una técnica para evaluar la actividad bactericida mediada por el complemento de los anticuerpos presentes en el suero. Este enfoque combina suero aislado con bacterias patógenas y proteínas exógenas del complemento. Tras la incubación, las bacterias se cultivan en una placa de agar y las colonias producidas se cuantifican para medir el título bactericida sérico.

Protocol

1. Preparar el complemento y las bacterias objetivo

1. Prepare el complemento de conejo bebé (BRC)
   NOTA: Los criterios detallados para la selección de lotes complementarios se pueden encontrar aquí: https://www.vaccine.uab.edu/uploads/mdocs/UAB-MOPA.pdf
   1. Obtenga BRC congelado y descongele con agua fría corriente. Mezcle físicamente el BRC cada ~ 10-20 min hasta que esté completamente descongelado. No someta el BRC a ciclos repetidos de congelación y descongelación.
   2. Mientras se descongela el BRC, etiquete los tubos de centrífuga de 1,5 mL, 5 mL o 15 mL. Coloque los tubos etiquetados sobre hielo par....

Results

Figura 1: Placas LBA después del revelado del color. Las microcolonias bacterianas representativas de S. flexneri 3a han crecido durante la noche hasta alcanzar el tamaño adecuado. Se ha añadido agar de superposición y las colonias han desarrollado un color rojo por reducción del compuesto TTC en el agar de superposición.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
gelatina	sigma	G9391	Tipo B, polvo, BioReactivo, apto para cultivo celular
TTC (cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio)	sigma	T8877	≥98.0% (HPLC)
Azida sódica (NaN3)	sigma	S2002	≥99.5%
Complemento Baby Rabbit	PelFreez	31061-3	3-4 semanas de edad
HBSS con Ca2+/Mg2+	Invitrogen	14065-56	Sin rojo fenol
Agar LB (Lennox)	sigma	L2897	Medio de crecimiento microbiano en polvo
Bacto Agar	Bd	214010	En polvo, (C12H18O9)n
glicerol	sigma	G5516	Para biología molecular, ≥99%
Caldo LB (Lennox)	sigma	L3022	Medio de crecimiento microbiano en polvo
Placa de Petri cuadrada	sigma	Z617679-240EA	120 mm x 120 mm
Placa de ensayo	Coprotagonista	3799	Placa inferior en U de 96 pocillos con tapa
Software NICE	Universidad de Alabama en Birmingham		ftp://ftp.nist.gov/pub/physics/mlclarke/NICE/