Estimulación in vitro y visualización de trampas extracelulares de macrófagos

Resumen

Fuente: Zhang, Y., et al. Estimulación in vitro y visualización de la liberación de trampas extracelulares en macrófagos diferenciados derivados de monocitos humanos. J. Vis. Exp. (2019).

Este video demuestra la estimulación in vitro de trampas extracelulares (METs) de macrófagos en macrófagos humanos derivados de monocitos utilizando diferentes estímulos inflamatorios como TNF-alfa, PMA y HOCL. El video también muestra el método de tinción con tinción de MET con tinte SYTOX para su visualización.

Protocolo

1. Polarización de HMDM

1. En condiciones estériles, prepare el medio de cebado M1 añadiendo interferón γ (IFNγ; 20 ng/mL) y lipopolisacárido (LPS; 1 μg/mL) al medio de cultivo RPMI-1640 completo. Prepare el medio de cebado M2 agregando interleucina 4 (IL-4; 20 ng/mL) al medio de cultivo RPMI-1640 completo.
2. En condiciones estériles, aspire los medios de los pocillos en placa de cultivo de tejidos que contengan los macrófagos derivados de monocitos humanos, HMDM, que se han sembrado y cultivado como se describe en la sección 1.
3. Lave cuidadosamente los pocillos que contienen las células 3 veces con PBS estéril (precalentado ....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Fuente de luz fluorescente de amplio espectro 120Q	EXFO Photonic Solutions, Toronto, Canadá	Serie X-CITE
Placa de pocillos múltiples Corning CellBIND (12 pocillos)	Sigma-Aldrich	CLS3336	Para cultivo celular
Ácido hipocloroso (HOCl)	Sigma-Aldrich	320331	Para la estimulación MET
Interferón gamma	Termo-Fisher	PMC4031	Para cebado M1
Interleucina 4	Ciencias Integradas	RHIL-4	Para cebado M2
Interleucina 8	Miltenyl Biotec	130-093-943	Para la estimulación MET
L-Glutamina	Sigma-Aldrich	59202C	Añadido a los medios de cultivo
Microscopio invertido Olympus IX71	Olimpo, Tokio, Japón
Forbol 12- miristato 13-acetato (PMA)	Sigma-Aldrich	P8139	Para la estimulación MET
Solución salina tamponada con fosfato (PBS)	Sigma-Aldrich	D5652	Para los pasos de lavado
Medios RPMI-1640	Sigma-Aldrich	R8758	Para cultivo celular
SYTOX verde	Tecnologías de la Vida	S7020	Para la visulaización del MET
Fuente de luz de campo claro TH4-200	Olimpo, Tokio, Japón		Serie X-CITE
Factor de necrosis tumoral alfa	Lonza	300-01A-50	Para la estimulación MET