Imágenes de fluorescencia enzimática reportera para el seguimiento in vivo de infecciones bacterianas

Resumen

Fuente: Sharan, R., et al. Imagen de Mycobacterium tuberculosis en ratones con fluorescencia de enzima reportera. J. Vis. Exp. (2018).

Este video muestra las imágenes de fluorescencia de enzimas reporteras (REF) para la detección in vivo de la infección por Mycobacterium tuberculosis. A los ratones infectados se les inyecta intraperitonealmente un sustrato para la obtención de imágenes REF. Al ser hidrolizado por la enzima bacteriana β-lactamasa, el sustrato emite fluorescencia, cuya detección ayuda a la evaluación de la infección.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Cepas y condiciones de cultivo

Nota: La cepa de M. tuberculosis CDC1551 se utiliza en este estudio, pero cualquier cepa de M. tuberculosis se puede utilizar de la misma manera.

1. Cultive las bacterias en un medio M-OADC-TW (caldo 7H9 suplementado con 0,5% de glicerol, 10% de ácido oleico dextrosa sin catalasa y 0,05% de Tween-80) a 37 °C a un OD₆₀₀ de 0,5 (~ 0,2 x....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Isoflurano	VETONE	501027
CNIR800	Sintetizado a medida
Solución Fatal Plus	Vortech Farmacéutica Ls, Ltd
Caldo 7H9 Middlebrook	Bd	271310
Enriquecimiento de OADC Middlebrook	Bd	212351
Esporcidina		RE-1284F
7H11 Agar Middlebrook	Bd	212203
Cámara de Madison
Espectro IVIS	Perkin Elmer	124262
Sistema de anestesia XGI-8-gas	Perkin Elmer
Software Living Imaging	Perkin Elmer
Conos nasales transparentes	Perkin Elmer
Cepa de M. tuberculosis CDC1551	ATCC
Ratones hembra BALB/C, 5-7 semanas	Laboratorio Jackson