Inducción de enterocolitis necrotizante en modelo enteroide epitelial humano

Abstract

Fuente: Ares, G. J., et al. Un nuevo modelo de enterocolitis epitelial humana de enterocolitis necrotizante. J. Vis. Exp.(2019).

Este video demuestra el desarrollo de la enfermedad de enterocolitis necrotizante en un modelo de enteroide neonatal derivado de humanos inducido por el tratamiento con lipopolisacáridos. Este modelo ayuda a estudiar la fisiopatología intestinal.

Protocol

Todos los procedimientos que involucran participantes humanos se han realizado de acuerdo con las directrices institucionales, nacionales e internacionales para el bienestar humano y han sido revisados por la junta de revisión institucional local.

1. Preparación de reactivos

1. Prepare la solución madre de los medios de cultivo para la recolección de tejido completo: 1 L de Medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM), 110 mL de Suero Fetal Bovino (FBS), 11 mL de Penicilina-Estreptomicina (concentración final 1%) y 1,1 mL de insulina esterilizada con filtro (concentración final 0,1%). Almacene la solución madre a 4 °C....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
4% Paraformaldehído	ThermoFisher	AAJ19943K2
Matriz de membrana basal (Matrigel)	Corning	CB-40230C
DMEM/F-12	ThermoFisher	MT-16-405-CV
Medio de águila modificada de Dulbecco (DMEM)	ThermoFisher	Teléfono 11-965-118
Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS)	ThermoFisher	14190-144
Factor de crecimiento epidérmico (EGF)	sigma	E9644-.2MG
Ácido etilendiaminotetraacético (EDTA)	sigma	EDS-500G
Suero fetal bovino (FBS)	Gemini Bio-Pro	De 100 a 125
Solución salina tamponada con fosfato (PBS)	sigma	P5368-5X10PAK
RPMI 1640 Medio	Invitrogen	11875093
Gel de procesamiento de tejidos (Histogel)	ThermoFisher	22-110-678
Lipopolisacárido (LPS)	sigma	L2630-25MG
gentamicina	sigma	G5013-1G