Tinción de células bacterianas y preparación para estudios inmunológicos

Resumen

Fuente: Yang, J. et al., Detección automatizada y de alto rendimiento de la adherencia bacteriana a las células huésped.J. Vis. Exp. (2021)

Este video muestra la tinción y preparación de células bacterianas para estudios inmunológicos utilizando colorante fluorescente rojo. Las bacterias teñidas se diluyen y se resuspenden en un medio de crecimiento para lograr la concentración bacteriana deseada para la infección de la célula huésped, lo que representa la multiplicidad de la infección.

Protocolo

1. Crecimiento bacteriano y tinción

1. Realizar todo el trabajo bacteriano en un Gabinete de Bioseguridad, laboratorio de Bioseguridad Nivel 2.
2. Inocular todos los cultivos bacterianos, incluyendo Pseudomonas aeruginosa (PAO1), Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Bacillus subtilis, etc., a partir de las existencias de glicerol congeladas y cultivarlos en caldo de soja tríptico (TSB, 3 mL) en una incubadora agitadora a 37 °C durante la noche mantenida a 250 rpm.
3. Al día siguiente, utilice una dilución 1:100 del cultivo durante la noche para inocular un subcultivo y cultivarlo en TSB (....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
10x PBS	VWR	45001-130
BactoView Live Red	Biotio	40101	Tinte antibacteriano
centrífuga	Eppendorf	5810R
E. coli			Stock de laboratorio
F-12k mediano	ATCC	302004	Medio de cultivo celular A549
Suero fetal bovino	Corning	35-016-CV
L. monocytogenes			Colecciones del NIST
OD600 DiluFotómetro	EL CASO
P. aeruginosa			Existencias de laboratorio de la Dra. Lori Burrows
P. aeruginosa ΔpilA			Existencias de laboratorio de la Dra. Lori Burrows
S. agalactiae			Colecciones del NIST
S. aureus	BEI	NR-46543
S. aureus ΔsaeR	BEI	NR-48164
S. rubidaea			Colecciones del NIST
Caldo de soja típico	Células de cultivo	MBPE-4040