Un procedimiento de corte de cola de ratón para la recolección de sangre periférica y el aislamiento de plasma

Resumen

Fuente: Coats, J. S. et al., Expresión de citocinas exógenas en xenoinjertos derivados de pacientes mediante inyección con una línea celular estromal transducida por citocinas. J. Vis. Exp. (2017)

En este video, demostramos un procedimiento de corte de cola en un modelo de ratón para recolectar sangre periférica. Posteriormente, la sangre recolectada se somete a centrifugación para separar el plasma, que se puede utilizar para experimentos posteriores.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Recolección de sangre en serie y monitoreo de plasma para citocinas humanas exógenas en ratones

1. Extracción de sangre mediante un corte de cola
   1. Desinfecte la capucha de bioseguridad y ensamble el protector de ratón, las tijeras y otras herramientas/suministros para el procedimiento.
   2. Coloque el ratón en un sujetador y asegure el tubo para minimizar el movimiento del ratón.
   3. Desinfecte la cola y las tijeras quirúrgicas con alcohol isopropílico. Aplica crema anestésica tópica en la cola.
   4. Con unas tijeras quirúrgicas muy afiladas, corte entre 0,5 y 1 mm de la punta de la cola del ratón. Recolectar aproximadamente 80 μL de sangre periférica utilizando tubos capilares heparinizados.
      nota: Si se va a recolectar sangre con este método más de seis veces, la extracción de la cola debe ser conservadora con respecto a la cantidad de cola extraída . A medida que los tijeretazos avanzan por la cola, el diámetro aumenta, se produce una hemorragia más rápida y la curación lleva más tiempo.

>2. Separación de plasma

1. Transfiera la sangre usando una pera de jeringa (para expulsarla de los tubos capilares) a un tubo microtainer K₂EDTA marcado; invierta 20 veces para prevenir la coagulación.
   nota: Por lo general, la coagulación de la sangre del pellizco de la cola es rápida. Sin embargo, si la hemorragia persiste por más de ~ 2 minutos, use un lápiz / polvo estíptico para ayudar a la coagulación.
2. Centrifugar los tubos de extracción de sangre de acuerdo con las instrucciones del fabricante y alícuota el plasma para su almacenamiento (-20 °C) hasta que esté listo para su posterior análisis.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Nano Transpondedor Implantable para Animales con Cánula	Trovan	ID-100B (1.25)
Crema anestésica de lidocaína EMLA (obtenida por precaución a través de un centro de cuidado de animales)	Prescripción	Prescripción
BD 1/2 cc LO-DOSE U-100 Jeringa de Insulina 28G1/2	Bd	#329461
Tubos Microtainer BD con K2EDTA	Bd	#365974
centrífuga	Beckman Coulter	Alegra X-15R
Tubos capilares FisherBrand (heparinizados)	Fisher Científico	22-260-950
Hemotómetro	pescador	02-671-6
MACSQuant Analyzer 10	Miltenyi Biotec	Teléfono 130-096-343
Jaula de pastel de ratón	Braintree Scientific, Inc.	MPC-1
Restricción del iluminador de la cola del ratón	Braintree Scientific, Inc.	MTI ETS
Implantador de empuñadura de pistola	Trovan	IM-300 (1.25)
"Ratones NSG" NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ, hombre o mujer, de 6 a 8 semanas de edad	Ratones JAX	# 005557