Una técnica in vitro para la generación de células T apoptóticas mediada por irradiación UV

Resumen

Fuente: Hodge, M. X., et al. Evaluación in vivo de la eferocitosis de macrófagos alveolares después de la exposición al ozono. J. Vis. Exp. (2019).

Este video muestra un método para inducir la apoptosis en las células Jurkat, una línea celular de leucemia de linfocitos T humanos. Las células están expuestas a la radiación ultravioleta C (UVC), que causa un daño extenso en el ADN y conduce a la muerte de las células apoptóticas.

Protocolo

1. Preparación de la línea celular T Jurkat (Día 2)

>NOTA: Todos los procedimientos deben realizarse en una cabina de seguridad biológica de clase II.

1. Cultivo de linfocitos T Jurkat en 24 mL de medio de cultivo basal + 10% FBS + 5% penicilina/estreptomicina a 37 °C + 5% CO₂ (Tabla de Material). Las células T Jurkat son una línea celular en suspensión que se puede mantener mediante el paso de 1:6-1:8 a medios de cultivo precalentados cada 3 días. No agitar.
2. Para preparar las células apoptóticas, hágalas crecer hasta un 90% de confluencia en cada matraz (lo que....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Kit de anexina V-FITC	Trevigen	4830-250-K	El kit TACS Annexin V-FITC permite la identificación rápida, específica y cuantitativa de la apoptosis en células individuales cuando se utiliza citometría de flujo.
Células T BCL2 Jurkat	ATCC	ATCC CRL-2899	La línea celular BCL2 Jurkat se derivó mediante la transfección de células T Jurkat humanas con el vector de expresión pSFFV-neo mammalí que contiene el inserto ORF BCL-2 humano y un gen resistente a la neomicina. Ha servido para modelos de medición de la eferrocitosis.
Contador de células automatizado Countess II	Termopescador	AMQAX1000	Se trata de una plataforma de ensayo de sobremesa equipada con óptica de última generación, enfoque automático completo y software de análisis de imágenes para una evaluación rápida de las células en suspensión. Muy fácil de usar.
Citocentrífuga Cytospin 4	Termopescador	A78300003	Proporciona preparaciones económicas de capa delgada a partir de cualquier matriz líquida, especialmente fluidos hipocelulares como el líquido de lavado broncoalveolar.
Suero fetal bovino, calificado, inactivado por calor	Termopescador	16140071	Proporciona nutrientes a las células cultivadas para que crezcan. Es estándar para el cultivo celular.
Penicilina-Estreptomicina	Sigma/Aldrich	P0781-100ML	La penicilina-estreptomicina es la solución antibiótica más utilizada para el cultivo de células de mamíferos. Además, se utiliza para mantener las condiciones de esterilidad durante el cultivo celular.
RPMI 1640 Medium, Suplemento GlutaMAX	Termopescador	61870036	RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium) fue desarrollado originalmente para cultivar células leucémicas humanas en suspensión y como monocapa. Desde entonces, se ha encontrado que el medio RPMI 1640 es adecuado para una variedad de células de mamíferos, incluidas HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocitos y carcinomas. Ayuda a cultivar células T Jurkat de manera rápida y eficiente.
Stratagene UV Stratalinker 1800 Reticulante UV	Científico de Cambridge	Año 16659	El reticulante UV Stratalinker está diseñado para inducir la apoptosis, reticulación de ADN o ARN a membranas de nylon, nitrocelulosa o nitrocelulosa reforzada con nylon.