Imágenes cuantitativas tridimensionales de fase para caracterizar subtipos de linfocitos

Abstract

Fuente: Yoon, J. et al. Identificación sin etiquetas de subtipos de linfocitos mediante imágenes de fase cuantitativas tridimensionales y aprendizaje automático. J. Vis. Exp.(2018)

Este video demuestra la identificación sin etiquetas de la morfología y la bioquímica de los linfocitos a través de imágenes de fase cuantitativas en 3D. Esta técnica permite un análisis exhaustivo de los linfocitos, descubriendo sus estructuras y propiedades internas sin necesidad de procedimientos de etiquetado.

Protocol

>1. Citometría de flujo y clasificación de subtipos de linfocitos

NOTA: La clasificación de linfocitos según el tipo de célula es esencial para establecer las etiquetas de tipo de célula verdaderas (es decir, correctas) para entrenar y probar un clasificador de tipo de célula en el aprendizaje supervisado. La citometría de flujo, un método de referencia, se utiliza para identificar y separar los linfocitos.

1. Prepare una mezcla de anticuerpos de tinción de marcadores de superficie en 100 μl de medio RPMI-1640 fresco [con 10 % de FBS, 0,1 μg de CD3e (17A2), CD8a (53-6,7), CD19 (1D3), CD45R (B220, RA3-6B2) y....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Citometría de flujo	BD Biociencias	Aria II o III
Cámara de imagen	Tomocube, Inc.	TomoDish
Holotomografía	Tomocube, Inc	HT-1H
Software de imágenes de holotomografía	Tomocube, Inc.	TomoStudio
Software de procesamiento de imágenes	Obras de matemáticas	Matlab R2017b
Tubo centrífugo cónico Falcon	ThermoFisher Scientific	14-959-53A	15 mL
Solución salina tamponada con fosfato	Sigma-Aldrich	806544-500ML
Tampón de lisado de amonio-cloruro-potasio	ThermoFisher Scientific	A1049201
RPMI-1640 medio	Sigma-Aldrich	R8758
Suero fetal bovino	ThermoFisher Scientific	10438018