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Artículo de método
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8 de julio de 2025
Fuente: Neuhaus, V. et al., Evaluación de los efectos citotóxicos e inmunomoduladores de sustancias en cortes de pulmón humanos cortados con precisión. J. Vis. Exp. (2018)
En este video, describimos un procedimiento para inflar pulmones humanos aislados con agarosa y preparar cortes de pulmón humanos cortados con precisión. Los cortes de pulmón ex vivo preparados se pueden utilizar para otros experimentos inmunológicos.
Todos los procedimientos relacionados con la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto.
1. Preparación general del PCLS humano y posterior exposición a productos químicos
NOTA: Se requieren dos personas para llenar un pulmón. Se recomienda tener un registro de vacunación actualizado contra la hepatitis A y B. Los pacientes se someten a pruebas rutinarias de detección del VHC y el VIH antes del trasplante de pulmón. Si se diagnostica o se sospecha una infección activa por Mycobacterium tuberculosis, se debe rechazar el pul....
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| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Manguera de silicona 3,0 x 5,0 mm | A. Hartenstein (Leipzig, Alemania) | SS04 | |
| jeringa | Faust Lab Science (Klettgau, Alemania) | 9.410 050 | |
| Herramientas de extracción de muestras | Hecho a medida | Hecho a medida | |
| Mango de la cuchilla de corte (FEATHER) | pfm medical ag (Colonia, Alemania) | 205530001 | |
| Cuchillas de corte (FEATHER) | pfm medical ag (Colonia, Alemania) | 205500000 | |
| Microtomo: Cortador de pañuelos | Investigación y desarrollo de Alabama (Bad Homburg, Alemania) | 303400-ADPT | Cortadora de pañuelos Krumdieck (MD6000) |
| Hoja de micrótomo | Espada Wilkinson (Solingen, Alemania) | ENR-4027800011506 | |
| Placas de cultivo de tejidos | Sigma (München, Alemania) | Z666246-420EA | |
| Asa de inoculación | Copan Diagnostics (Murrieta, Estados Unidos) | CD176S01 | |
| TPP Placas de cultivo de tejidos 24 pocillos | Sigma (München, Alemania) | Z707791-126EA | |
| casete | Thermo Scientific (Schwerte, Alemania) | 1000957 | |
| Nunc MaxiSorp de fondo plano | Fisher Scientific GmbH (Hannover, Alemania) | 44-2404-21 | |
| Nunc MicroWell 96-Pocillos | Thermo Scientific (Schwerte, Alemania) | 260836 | |
| Reactivos | |||
| Agarosa, baja temperatura de gelificación | Sigma (München, Alemania) | A9414-100G | |
| Mezclas y soluciones salinas equilibradas, cultivo celular, medios y sales clásicos, sales equilibradas de Earle (EBSS) | Sigma (München, Alemania) | E2888-500ML | |
| Penicilina y estreptomicina | Lonza (Verviers, Bélgica) | 17-602E | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Medium Nutrient Mix F-12 Jamón (DMEM F-12) | Gibco (Darmstadt, Alemania) | 11039-047 | medio de cultivo |
| Fosfato de Dulbecco con Ca y Mg (DPBS) | Lonza (Verviers, Bélgica) | BE17-513F |
