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Artículo de método

Una técnica de cromatografía de exclusión por tamaño para purificar vesículas extracelulares micobacterianas

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8 de julio de 2025

En este artículo

Resumen

Fuente: Ryan, J. M., et al. Mycobacterium tuberculosis Enriquecimiento de vesículas extracelulares mediante cromatografía de exclusión por tamaño. J. Vis. Exp. (2022).

Este video muestra la técnica de cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) para purificar vesículas extracelulares (EV) bacterianas del filtrado de cultivo de Mycobacterium tuberculosis (Mtb). La técnica utiliza una columna porosa empaquetada de resina para obtener fracciones purificadas de EV. Las partículas porosas permiten selectivamente que las proteínas más pequeñas entren en los poros, lo que resulta en una elución más lenta. Al mismo tiempo, los EV están excluidos de entrar en los poros debido a su mayor tamaño y se eluyen primero.

Protocolo

1. Preparación de concentrado crudo de Mtb EV

NOTA: Para conocer los procedimientos detallados sobre el cultivo de Mtb y la preparación de la proteína filtrada de cultivo (CFP), consulte Referencias. Se recomienda que los medios de cultivo bacteriano estén libres de suplementos de crecimiento con componentes proteicos o que contengan EV, como la albúmina oleica dextrosa catalasa (OADC) y detergentes como Tween. También se recomienda que la calidad del cultivo bacteriano y el CFP cosechado se examinen para garantizar una muerte y lisis celular limitadas.

  1. Prepare un filtro centrífugo de corte de p....

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Divulgaciones

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Placa de 96 pocillosCorning15705-066
Colector automático de fraccionesCiencia IZONAFC-V1-USD
Centrífuga de sobremesaBeckman CoulterAllegra 6R
Centricon Plus - 70 Filtro centrífugo, corte de 100 kDaMillipore SigmaUFC710008Dispositivo de ultrafiltración utilizado en el paso 1.1
Solución salina tamponada con fosfato, 1X sin calcio ni magnesioCorning21-040-CV
Kit de ensayo de proteínas Pierce BCAThermoFisher Scientific23225
qEV Original 35 nm 5/paqueteCiencia IZONSP5-USDColumna SEC

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