Un ensayo de biopelícula de placa de clavija para el cribado de agentes antibacterianos

Abstract

Fuente: Dalecki, A. G., et al. Targeting Biofilm Associated Staphylococcus aureus Using Resazurin Based Drug-susceptibility Assay. J. Vis. Exp. (2016)

Este video muestra un ensayo para el cribado de compuestos antimicrobianos que eliminan eficientemente las biopelículas utilizando una placa de clavija. La metodología monitoriza el estado metabólico del biofilm tras el tratamiento con compuestos antimicrobianos, facilitando la determinación de la concentración mínima de erradicación del biofilm.

Protocol

>1. Iniciación de la biopelícula

1. Cultive un cultivo de organismos productores de biopelículas en un medio rico en nutrientes. Inocular Staphylococcus aureus cepa Newman en 10 ml de medio Mueller-Hinton a partir de una calda de glicerol. Realizar todos los trabajos que impliquen la manipulación de S. aureus con guantes y dentro de una cabina de bioseguridad.
2. Incubar durante 16 horas a 37 °C en un agitador rotativo (100-200 rpm).
3. Determine el diámetro exterior₆₀₀ del cultivo utilizando un espectrofotómetro y una cubeta estándar (longitud del recorrido: 1 cm).
4. Calcule el volumen (V) de....

Results

Figura 1. Disposición de la placa de desafío. Ejemplo de disposición de la placa de desafío que admite pruebas paralelas de cuatro compuestos por triplicado a seis concentraciones distintas. También se incluyen controles sin tratar y de esterilidad. El diseño de la disposición permite una cómoda preparación en placa de diluciones en serie mediante una pipeta multicanal. Las concentraciones se expresa.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Mueller-Hinton Medio	Oxoide	CM0405	Siga las recomendaciones del fabricante
RPMI-medio	Corning	17-105-CV
CRPMI (en inglés)	Ref 9		RPMI-1640 chelexado medio durante 1 hora con resina Chelex 100 y luego suplementado con RPMI-1640 sin quelex al 10%
Resina Chelex 100	Bio Rad	Números 142-2822
Placas MBEC	Innovotech	Año 19111
Sal sódica de Resazurin	sigma	R7017	800 μg/ml en agua desionizada Filtro estéril
Plataforma de agitación de micro placas	Heidolph Titramax 1000
Lector de placas Cytation 3	Biotek
Software Gen5	Biotek		Registro y análisis de la conversión de la resazurina
Neocuproína	sigma	N1501	Preparar 10 mM de caldo en Etanol 100%, almacenar a -80 ºC
Sulfato de cobre	Acros Organics	7758-99-8	Preparar una solución madre de 100 mM en agua, almacenar a 4 ºC
Cu-Neocuproína	casero		Se genera mezclando molaridades iguales de neocuproína y sulfato de cobre. La mezcla se diluyó en medio CRPMI hasta la concentración deseada.
gentamicina	sigma	G3632-1G