Una tecnología de hibridoma para producir anticuerpos monoclonales contra una metalopéptidasa

Resumen

Fuente: Xia, P., et al. Producción de anticuerpos monoclonales dirigidos a la aminopeptidasa N en el epitelio de la mucosa intestinal porcina. J. Vis. Exp. (2021).

Este video muestra un ensayo para producir anticuerpos monoclonales contra la aminopeptidasa porcina N (APN), una metalolopeptidasa unida a la membrana, utilizando una tecnología tradicional de hibridoma. Al inmunizar a un ratón con APN, las células del bazo se recolectan y se fusionan con células de mieloma inmortales para producir hibridomas. A continuación, los hibridomas se seleccionan y proliferan utilizando el medio HAT (hipoxantina-aminopterina-timidina) para producir anticuerpos monoclonales específicos para diferentes epítopos de APN.

Protocolo

Todos los procedimientos de modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Inmunización animal

1. Por vía subcutánea (s.c.) inyecte a ratones hembra BALB/c, de 6 a 8 semanas de edad, 50 μg de proteína APN o solución salina tamponada con fosfato (PBS, control negativo) mezclada con adyuvantes una vez cada 2 semanas. Use el adyuvante completo de Freund que contiene las micobacterias muertas por calor para la inmunización inicial, y el adyuvante incompleto de Freund para las inmunizaciones de refuerzo. Mezcle volúmenes iguales....

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Completa el adyuvante de Freund	Sigma-Aldrich	F5881	Inmunización animal
DMEM	Gibco	11965092	cultivo celular
DMEM-F12	Gibco	12634010	cultivo celular
Kit de conteo de células mejorado-8	Beyotime Biotecnología	C0042	Medición de la viabilidad y vitalidad celular
Suero fetal bovino	Gibco	10091	cultivo celular
Antibiótico selectivo Geneticin™	Gibco	11811098	Antibiótico selectivo
Suplemento HAT (50X)	Gibco	21060017	Selección de células
Suplemento HT (100X)	Gibco	11067030	Selección de células
Adyuvante de Freund incompleto	Sigma-Aldrich	F5506	Inmunización animal
Lector de microplacas	BioTek	CAJA 998	Análisis ELISA
Polietilenglicol 1500	Roche Diagnostics	10783641001	Fusión celular
Microplaca de 96 pocillos	Corning	3599	cultivo celular