Una técnica de imagen PET in vivo para detectar tumores en un modelo murino utilizando anticuerpos radiomarcados

Resumen

Fuente: Zeglis, B. M., et al. La bioconjugación y radiosíntesis de ⁸⁹anticuerpos marcados con Zr-DFO. J. Vis. Exp. (2015).

Este video muestra una técnica que involucra un radioinmunoconjugado para la obtención de imágenes in vivo de un tumor en un modelo de ratón. Tras la inyección del radioinmunoconjugado, los anticuerpos del conjugado se unen a un antígeno de membrana específico en las células cancerosas. El radiotrazador del conjugado emite positrones que interactúan con los electrones vecinos para producir energía, que es detectada por un escáner de tomografía por emisión de positrones (PET) para crear una imagen del tumor.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Imágenes PET in vivo con ⁸⁹Zr-DFO-J591

>PRECAUCIÓN: Este paso del protocolo implica el manejo y manipulación de la radiactividad. Antes de realizar estos pasos, los investigadores deben consultar con el Departamento de Seguridad Radiológica de su institución de origen. Se deben tomar todas las medidas posibles para minimizar la exposición a la radiación ionizante.

1. En ratones machos atímicos desnudos, implantar subcutáneamente células cancerosas de carcinoma de ganglio linfático de próstata (LNCaP) 5 x 10⁶ y permitir que crezcan hasta un xenoinjerto^{de 100-150 mm 3} (3-4 semanas después de la inoculación).
2. Diluir el radioinmunoconjugado ⁸⁹Zr-DFO-J591 a una concentración de 1,0 mCi/ml en solución salina estéril al 0,9%.
3. Inyectar 200 μl de la solución ⁸⁹Zr-DFO-J591 (DFO = deferoxamina, J591 = anticuerpo dirigido al antígeno de membrana específico de la próstata [PSMA]) (200 μCi; 7,4 MBq) en la vena lateral de la cola de los ratones portadores de xenoinjertos.
4. En el momento deseado de la imagen (por ejemplo, 12, 24, 48, 72, 96 o 120 horas después de la inyección), anestesiar al ratón con una mezcla de isoflurano y oxígeno gaseoso al 2%.
5. Coloque el ratón en la cama del escáner PET para animales pequeños y mantenga la anestesia durante la exploración utilizando una mezcla de isoflurano y oxígeno gaseoso al 1%. Antes de colocar al animal en la cama del escáner, verifique la anestesia con el método de pellizcar los dedos de los pies y aplique ungüento oftálmico en los ojos del ratón para evitar que se seque durante la anestesia.
6. Adquiera los datos PET para el ratón a través de un escaneo estático con un mínimo de 40 millones de eventos coincidentes utilizando una ventana de energía de 350-700 keV y una ventana de temporización de coincidencia de 6 nseg.
7. Después de completar la adquisición de la imagen, no deje al ratón desatendido y no lo coloque en una jaula con otros ratones hasta que haya recuperado la conciencia.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
p-SCN-Bn-DFO	Macrocíclicos	B-705	Almacenar a -80 °C
[89Zr]Zr-oxalato	Varios, incluyendo a Perkin-Elmer	-	Precaución: Material radiactivo