Un inmunoensayo en papel para la detección de inmunoglobulina G

Resumen

Fuente: Peng, Y. et al., Unión covalente de anticuerpos a discos de papel de celulosa y sus aplicaciones en inmunoensayos colorimétricos a simple vista.J. Vis. Exp. (2016)

El video muestra un inmunoensayo en papel, que involucra discos de celulosa funcionalizados con amina reticulados con glutaraldehído. La inmovilización covalente de anticuerpos de captura específicos de IgG-Fc, seguida de la introducción de anticuerpos de detección conjugados con inmunoglobulina G y peroxidasa de rábano picante, da como resultado un cambio de color que confirma la presencia de inmunoglobulina G.

Protocolo

>1. Injerto de grupos funcionales de amina en discos de papel de celulosa

1. Prepare una hoja de papel cuadrado con una dimensión de 1 cm × 1 cm, y 100 discos de papel hechos de papel de celulosa de grado No. 1 con un diámetro de 6,0 mm (papel de filtro de flujo medio) con una perforadora.
2. Para obtener los grupos -NH₂ en los discos de papel, mezcle 1 ml de 3-aminopropiltrimetoxisilano (APS) y 10 ml de acetona en un frasco de vidrio de 50 ml en la campana extractora. Añada discos de papel a la mezcla de reactivos APS recién preparada e incube durante 5 horas con agitación orbital (200 rpm) a temperatura ambiente.
   

Resultados

Figura 1.Espectros infrarrojos por transformada de Fourier (FTIR) de papel cuadrado de filtro de flujo medio (A) sin tratar y tratado con APS y papel cuadrado de filtro de flujo rápido (B). A. Los espectros del papel cuadrado de filtro de flujo medio sin tratar fueron similares a los del papel cuadrado de filtro de flujo medio tratado con APS. El aumento de las inten.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Papel de filtro de celulosa, Grado 1 (papel de filtro de flujo medio)	GE Healthcare Pte Ltd Singapur	1001 110
Papel de filtro de celulosa, Grade113 (Papel de filtro de flujo rápido)	Sigma-Aldrich, Singapur	1113-320
3-aminopropiltrimetoxisilano	Sigma-Aldrich, Singapur	T1255	>96%
Glutaraldehído	Sigma-Aldrich, Singapur	G6257	Grado II, 25% en H2O
Álbum de suero bovino	Sigma-Aldrich, Singapur	A2153
Leche desnatada en polvo	Louis François		Empaquetado por Kitchen Capers, Singapur
Base Tris	Promega	H5135
Periodato de sodio	Merck	106597
Na2HPO4	Merck	106585
KH2PO4	Merck	104873
NaCl	CALBIOCHEM	567441
NaOH	Merck	106462
Hcl	Merck	100317
Tampón de fosfato salino (PBS)	N/A	N/A	El PBS, que contiene 137 mmol/L de NaCl, 2,7 mmol/L de KCl, 8,0 mmol/L de Na2HPO4 y 1,5 mmol/L de KH2PO4, se prepara con agua y se ajusta a un pH de 7,4 con 0,1 mol/L de NaOH o 0,1 mol/L de HCl
acetona	Tee Hai Chem Pte Ltd Singapur	9005-68
Mezcla de TMB y solución de peróxido de hidrógeno	Solución ultra TMB-ELISA de 1 paso, Thermo Scientific Pierce	34029	1 L
Anticuerpo de recubrimiento anti-IgG-Fc de cabra purificado por afinidad	Laboratorios Bethyl, Inc	A90-131A
Suero de referencia para ratones	Laboratorios Bethyl, Inc	RS10-101-5	9.5 mg/mL
HRP conjugado anti-ratón de cabra anticuerpo de detección IgG-Fc	Laboratorios Bethyl, Inc	A90-131P
equipo
Espectrofotómetro infrarrojo por transformada de Fourier	Shimadzu IR Prestige-21	N/A
horno	NUVE FN500	N/A
Mezclador turbo VM-2000	MYC LTD	N/A
Imagen J	RGB, descarga gratuita	N/A