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Artículo de método

Una técnica de cromatografía de afinidad para la purificación de anticuerpos monoclonales

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8 de julio de 2025

En este artículo

Resumen

Fuente: Elgundi, Z., et al. Producción y purificación a escala de laboratorio de un anticuerpo terapéutico. J. Vis. Exp. (2017).

Este video muestra una técnica para purificar anticuerpos monoclonales del sobrenadante de cultivo obtenido de un cultivo celular productor de anticuerpos. El proceso implica el uso de una matriz de perlas de agarosa reticuladas con proteína A conjugada, que inmoviliza los anticuerpos en el sobrenadante de las perlas, lo que permite una separación efectiva de los contaminantes. Al aplicar un tampón de elución con pH bajo, se afloja la interacción proteína-anticuerpo, lo que facilita la recolección de fracciones que contienen anticuerpos.

Protocolo

1. Purificación de anticuerpos por cromatografía de afinidad utilizando un sistema automatizado de cromatografía rápida de proteínas y líquidos (FPLC)

NOTA: El siguiente procedimiento se puede aplicar generalmente a la mayoría de los sistemas automatizados. La purificación se puede realizar a temperatura ambiente o a 4 °C (si el sistema FPLC se mantiene en una habitación fresca). Se puede realizar una serie de pruebas de exploración para identificar las condiciones óptimas de purificación, incluida la matriz de columna adecuada, el tampón de unión, el tampón de elución y el pH para garantizar la máxima recupe....

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Divulgaciones

No se han declarado conflictos de interés.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Comprimidos de solución salina tamponada con fosfato (PBS), pH 7,4, 100 ml09-2051-100Astral Científico
HiTrap Protein A High Performance, 1 columna de 5 mlGE17-0403-01Sigma-Aldrich
AKTApurificador 10028406266GE Cuidado de la SaludSistema FPLC automatizado, que puede incluir una bomba de muestra P-960 y un colector de fracciones Frac-920.
Glicina-HClG2879Sigma-Aldrich
Ácido cítrico, monohidratoBIOC2123Astral Científico
Citrato de sodio, sal trisódica dihidratadaBIOCB0035Astral Científico
1 M de solución de Tris-HCl pH 9.0BIOSD8146Astral Científico
Filtros ultracentrífugos Amicon (30 MWCO)UFC803008/UFC903008Merck MilliporeSe utiliza para amortiguar, intercambiar y concentrar proteínas purificadas.
Kit de ensayo de ácido bicinconínico (BCA) de Pierce23227Thermo Fisher Scientific
Sistema BLItz45-5000fortéBIOInstrumento utilizado para mediciones de interferometría de biocapa (BLI).
Biosensores de proteína A18-5010fortéBIO

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