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Una tecnología de microarrays de péptidos para el perfil de especificidad de los anticuerpos

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fuente: Cornett, E. M., et al. Análisis de la especificidad de anticuerpos de histonas con microarrays de péptidos. J. Vis. Exp. (2017).

Este video muestra una técnica que aplica la tecnología de microarrays de péptidos para perfilar la especificidad de los anticuerpos reconociendo modificaciones postraduccionales (PTM) en péptidos de histonas. Un portaobjetos de microarray que contiene péptidos de histonas conjugados con fluoróforos inmovilizados con combinaciones conocidas de PTM se trata con anticuerpos específicos de PTM diana. Este proceso ayuda a identificar la especificidad del anticuerpo para el objetivo y su posible reactividad cruzada con PTM no objetivo.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

>1. Diseñando la diapositiva de la matriz y el diseño de la placa fuente

  1. En el encabezado 'Planificar un diseño de diapositivas' en la interfaz de ArrayNinja, haga clic en el enlace que corresponde a la impresora de microarrays que se está utilizando.
    nota: ArrayNinja ha sido programado para imitar el movimiento robótico de dos impresoras de microarrays de uso común (ver Tabla 1). La compatibilidad con los otros arreglos se puede configurar a pedido.
  2. Haga clic dentro del cuadro de diálogo 'Cargar placa', escriba "vacío" y haga clic en 'enter'. Consulte la Figura 1 para ver una captura de pan....

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Figura 1: Módulo de diseño de ArrayNinja. Se muestra una captura de pantalla del módulo de diseño ArrayNinja en la línea de puntos. El panel de control (arriba) muestra todos los parámetros que se pueden modificar en la impresora de microarrays. A medida que se ajustan estos parámetros, la imagen de dibujos animados del diseño de la diapositiva (abajo a la izquierda) se actualiza en tiempo real. Una .......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
No se han declarado conflictos de interés.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Búfer de impresiónArrayIt (en inglés)Ppb
BsaOmnipuroArtículo 2390
Portaobjetos de microscopio de vidrio recubiertos de estreptavidinaGreiner Bio-one439003-25
placa de pocillos de polipropileno 384Greiner Bio-one784201
Biotina-fluoresceínasigma53608
Contactar con la impresora MicroArrayAushonArtículo 2470Impresora de micromatrices Aushon 2470
Contactar con la impresora MicroArrayMáquinas genéticasOmniGrid 100Impresora de micromatrices OmniGrid
PbsInvitrogenAño 14190
Búfer de bloqueoArrayIt (en inglés)SBB
Bolígrafo de cera hidrofóbicoLaboratorios VectorialesH-4000Bolígrafo PAP de barrera hidrofóbica ImmEdge
Junta de siliconaLaboratorios biológicos de Grace622511
Recipiente de hibridaciónTermo Científico267061o buque similar
Anticuerpo secundario conjugado con colorante fluorescenteTecnologías de la VidaA-21244Alexa Fluor 647 (anti-conejo)
Anticuerpo secundario conjugado con colorante fluorescenteTecnologías de la VidaA-21235Alexa Fluor 647 (anti-ratón)
Impresora de ceraArrayIt (en inglés)MSI48
Preadolescente-20Omnipuro9490
Escáner de microarraysInnopsysInnoScan 1100ALo un escáner de microarrays equivalente
Microarray de péptidos de histona EipTitanEpicypher112001
Microarray de péptidos AbSurance Pro HistoneMillipore16668
Matriz de péptidos de histonas MODifiedMotivo activoAño 13001
Microarrays de péptidos de código histonaJPTHis_MA_01
ceraRoble RealCera del Golfopara impresora de cera
Cámara de hibridación de portaobjetos de microarrays humidificadosVWR97000-284
Cámara de lavado de portaobjetos de microscopio de alto rendimientoArrayIt (en inglés)HTW
Centrífuga de portaobjetos para microscopioVWR93000-204
Anticuerpo 1Abcam8898
Anticuerpo 2Millipore07-473
Péptido de histonas biotiniladasEpiCypher (en inglés)12-2001Ejemplo de péptido. Péptidos similares con diversas modificaciones están disponibles en varias fuentes comerciales.
Magia de imagenhttps://www.imagemagick.org/script/index.php
ArrayNinjahttps://rothbartlab.vai.org/tools/

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Peptide MicroarrayAntibody SpecificityHistone PeptidesPost Translational ModificationsFluorescence DetectionMicroarray ScannerHybridization BufferSecondary AntibodiesBlocking BufferWax Imprinter

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