Artículo de método

Una tecnología de chip a presión para un inmunoensayo sándwich multiplexado sin reactividad cruzada

766 vistas

8 de julio de 2025

En este artículo

Resumen

Fuente: Li, H. et al., Snap Chip para inmunoensayos sándwich multiplexados sin reactividad cruzada y sin observadores.J. Vis. Exp. (2017)

El video muestra la implementación de la tecnología de chip instantáneo para inmunoensayos sándwich multiplexados sin reactividad cruzada. La simple acción de encajar dos portaobjetos de microarrays, cada uno de los cuales contiene diferentes reactivos, garantiza la transferencia de reactivos sin contaminación cruzada y ayuda a detectar múltiples proteínas mediante inmunoensayo sándwich.

Protocolo

Todos los procedimientos relacionados con la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto.

1. Fabricación y almacenamiento de chips de presión

  1. Método de transferencia única (Figura 1a)
    1. Soluciones puntuales de cAb que contienen 400 μg/mL de anticuerpos y 20% de glicerol en solución salina tamponada con fosfato (PBS) en un portaobjetos de ensayo de nitrocelulosa (o vidrio funcionalizado) con un observador de microarrays de inyección de tinta a una humedad relativa del 60% (1,2 nL para cada punto) con un espaciado de centro a centro de 80....

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Resultados

figure-results-1
Figura 1. Esquema del procedimiento de ensayo comparando (a) los métodos de transferencia simple y (b) doble.

figure-results-2
Figura 2. Esquema que muestra las diferencias entre transferencia simple y doble.(a) la duplicación de los reactivos de transferencia amplific.......

Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.

Divulgaciones

No se han declarado conflictos de interés.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Comprimido de solución salina tamponada con fosfatoFisher Científico5246501EA
Cy5 conjugada con estreptavidinaRocklandS000-06
Preadolescente-20Sigma-Aldrichpág. 1379
Albúmina sérica bovinaLaboratorios de Investigación Inmunológica de Jackson, Inc001-000-162
glicerolSigma-AldrichG5516
Solución de bloqueo: Estabilizador de microarrays StabilGuard Choice sin BSASurModics, IncSG02
Portaobjetos recubiertos de nitrocelulosaGrace Bio-Laboratorios, Inc305116
Portaobjetos recubiertos de aminosilanoSchott América del Norte1064875
Dispositivo de ajusteParallex BioAssays Inc.PBA-SD01
Observador de microarrays de inyección de tintaGeSiMNanoplotter 2.0
Junta del módulo deslizanteGrace Bio-Laboratorios, Inc204862
Perlas de estabilización de la humedadParallex BioAssays Inc.PBA-HU60
Software Array-Pro AnalyzerCibernética de los medios de comunicaciónVersión 4.5
Escáner de microarrays de fluorescenciaAgilentEscáner de microarrays SureScan
Software de bioestadísticaSoftware GraphPadPrisma GraphPad 6
Anticuerpo de captura de endoglinaSistemas de investigación y desarrolloMAB10972
Proteína endoglinaSistemas de investigación y desarrollo1097-ES
Anticuerpo de detección de endoglinaSistemas de investigación y desarrolloBAF1097
IL-6a (ver Tabla 1)Sistemas de investigación y desarrollo
IL-6b (ver Tabla 1)Invitrogen

Reimpresiones y permisos

Solicitar permiso para reutilizar el texto o las figuras de este artículo de JoVE

Solicitar permiso

Etiquetas

Detecci n sin reactividad cruzadaDiluci n de est ndar proteicoDetecci n mediante esc ner fluorescenteUni n de fluor foro a la estreptavidinaAnticuerpos de detecci n biotiniladosInteracciones prote na anticuerpoDiluci n seriada de prote nasCuantificaci n de puntos de fluorescencia

Artículos relacionados