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Un método de inmunotinción múltiple que utiliza anticuerpos primarios de la misma especie huésped

July 8th, 2025

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Abstract

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fuente: Lyu, Q., et al. microondas y fluoróforo-tiramida para la inmunotinción múltiple en glándulas suprarrenales de ratón − utilizando anticuerpos primarios no conjugados de la misma especie huésped. J. Vis. Exp. (2020).

Este video muestra un ensayo para realizar inmunotinción múltiple utilizando anticuerpos primarios de la misma especie huésped. En este método, una sección de tejido suprarrenal se somete a un proceso de inmunotinción de dos pasos. Inicialmente, la sección se tiñe con anticuerpos específicos para los marcadores en la corteza, seguido de la extracción del anticuerpo unido y se vuelve a teñir con anticuerpos específicos para los marcadores en la médula.

Protocol

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Todos los procedimientos relacionados con la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto.

1. Tinción con el primer anticuerpo

  1. Desparafinar y rehidratar portaobjetos fijados en formalina e integrados en parafina (FFPE) con 5 minutos asignados a cada uno de los siguientes pasos: xileno o reactivos equivalentes 3x, 100% etanol 2x, 95% etanol 1x, 70% etanol 1x, 50% etanol 1x y agua destilada 2x.
    nota: Los portaobjetos deben permanecer húmedos desde este paso de rehidratación hasta el montaje en el paso final.
  2. Para la recuperación opc....

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Disclosures

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$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
No se han declarado conflictos de interés.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Medio de montaje antidecoloraciónLaboratorios de vectoresH-1000
Burro biotinilado anti-ratónJacksonImmuno715-066-151Dilución 1:500
Burro biotinilado anti-conejoJacksonImmuno711-066-152Dilución 1:500
DAPIBioLeyenda4228012 μg/mL en agua destilada
Microscopio de fluorescenciaecoRevolución 4
Estreptavidina conjugada con peroxidasa de rábano picanteJacksonImmuno016-030-084Dilución 1:1000
Horno microondas, 700WGeneral ElectricJEM3072DH1BB
Ratón anti-CYP2F2Santa CruzSC-374540Dilución 1:250
Ratón anti-THSanta CruzSC-25269Dilución 1:1000
Suero de burro normalJacksonImmuno017-000-1212% de suero en PBST
Conejo anti-20αHSDKerafast,EB4002Dilución 1:500
Conejo anti-3βHSDtransgénicoKO607Dilución 1:250
Conejo anti-THNovusNB300-109Dilución 1:1000
Conejo anti-β-cateninaAbcam,AB32572Dilución 1:500
Estreptavidina Peroxidasa de rábano picante (SA-HRP)JacksonImmuno016-303-084Dilución 1:1000
Tiramida TSA Cy3PerkinElmerSAT704B001EADilución 1:100
Tiramida de fluoresceína TSAPerkinElmerSAT701001EADilución 1:100

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Multiplex ImmunostainingPrimary AntibodiesFluorophore TyramideAntibody StrippingAdrenal TissueCortex MedullaMicrowave Antigen RetrievalStreptavidin PeroxidaseNuclear StainingFluorescence Microscopy

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