Este video muestra la purificación de péptidos a través del procedimiento STAGE Tip. Una columna en miniatura que contiene perlas de resina unidas a largas cadenas de hidrocarburos facilita la purificación basada en la interacción hidrofóbica. Al cargar una muestra de péptido predigerido en la columna, los fragmentos de péptido se unen a las perlas de resina, permitiendo el paso de las impurezas. Se aplica un tampón de elución que interrumpe la interacción hidrofóbica para eluir los fragmentos peptídicos.
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Artículo de método
Un procedimiento de punta STAGE para la desalinización y purificación de péptidos
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15 de enero de 2026
En este artículo
Resumen
Protocolo
>1. Purificación y desalinización de péptidos
- Empaque tres capas de resina C18 en una punta de pipeta de 200 μl para cada muestra de péptido para construir una punta de extracción STop And Go (STAGE).
- Añada 1/10 de solución de parada (acetonitrilo al 20% [ACN]] y ácido trifluoroacético al 6% [TFA]) a las muestras.
- Muestras centrífugas para la precipitación de pellets a 13.200 rpm durante 10 min.
- Transfiera el sobrenadante a un nuevo tubo de 2 mL y deseche el pellet.
- Puntas de la etapa de lavado con 100 μl de 100% ACN.
- Puntas de centrífuga STAGE a 1000 x g durante 2 min.
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Divulgaciones
No se han declarado conflictos de interés.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Tubo Falcon de 15 ml | VWR | 470225-000 | |
| 25 mL Serológico | Fisher Científico | 14955235 | |
| Bicarbonato de amonio (ABC) | ThermoFisher Scientific | A643-500 | |
| ácido acético | Sigma Aldrich | 1099510001 | |
| acetona | Sigma Aldrich | 34850-1L | |
| Acetonitrilo (ACN), grado MS | perforar | TS-51101 | |
| Kit de ensayo BSA | VWR | CA62408-940 | |
| Discos C18 (puntas STAGE) | Fisher Científico | 13110019 | |
| centrífuga 5810 R | Sigma Aldrich | EP022628188 | |
| Ditiotreitol (TDT) | ThermoFisher Scientific | R0861 | Preparar 1M de stock de alícuotas de TDT y almacenar a -20°C |
| Suero fetal bovino (FBS) | ThermoFisher Scientific | 12483020 | Descongelar, preparar las alícuotas y almacenar a -20 °C |
| HEPES | Sigma Aldrich | H3375 | Prepare 8 m de urea/40 m de alícuotas HEPES, almacene a -20 °C |
| Espectrómetro de masas de alta resolución | ThermoFisher Scientific | 726042 | |
| Yodoacetamida (IAA) | Fisher Científico | AAA1471514 | Prepare 0,55 millones de existencias de alícuotas de IAA y almacene a -20 °C. Evite la exposición a la luz |
| L-glutamina | Fisher Científico | 25030081 | Descongelar, preparar las alícuotas y almacenar a -20 °C |
| Tubos de microcentrífuga LoBind | Eppendorf | 13-698-794 | |
| MaxQuant | https://www.maxquant.org/ | ||
| Tubos de tiras de PCR | VWR | 76318-802 | |
| Penicilina Estreptomicina, Anfotericina | Sigma Aldrich | A5955 | Descongelar, preparar las alícuotas y almacenar a -20 °C |
| Perseo | https://www.maxquant.org/Perseus/ | ||
| solución tamponada con fosfato (PBS) | Biotienda | PBS408 | Almacenar a temperatura ambiente |
| Sonicador de sonda | Fisher Científico | Llame al 100-132-894 | |
| Comprimido de cóctel inhibidor de proteasa (PIC) | Sigma Aldrich | 5892791001 | Almacenar a 4°C |
| RPMI 1640 | ThermoFisher Scientific | 11875093 | Almacenar a 4°C |
| Dodecil sulfato de sodio (SDS) | ThermoFisher Scientific | J18220. A1 | preparar una solución SDS al 2% |
| Centrífuga SpeedVac | Eppendorf | 07-748-15 | |
| Centrífuga basculante STAGE | Sonación | STC-V2 | |
| Frascos T75 | ThermoFisher Scientific | 156499 | |
| Ácido trifluoroacético | ThermoFisher Scientific | 85183 | |
| Tris HCL pH 8.5 | Fisher Científico | BP152-1 | Almacenar a 4°C |
| Tripsina/LysC | Thermo Fisher Scientific | A40009 | alícuota y almacenar a -20°C |
| Baño ultrasónico | VWR | 97043-960 | |
| urea | Biotienda | URE001.1 |
