Este video muestra un ensayo de neutralización que mide la eficacia del suero para neutralizar los virus SARS-CoV-2. Involucra virus pseudotipados, dilución en suero y cuantificación basada en luminiscencia, revelando el título de neutralización.
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Artículo de método
Evaluación de anticuerpos neutralizantes funcionales contra el SARS-CoV-2
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15 de enero de 2026
En este artículo
Resumen
Protocolo
Todos los procedimientos relacionados con la recolección de muestras se han realizado de acuerdo con las directrices del IRB del instituto.
1. Ensayo de neutralización basado en pseudotipos
NOTA: pMN es la inhibición de la transducción mediada por virus de pseudotipo (PV) a través de muestras de suero de convaleciente humano que contienen anticuerpos dirigidos contra la espiga del SARS-CoV-2.
- En una placa blanca de 96 pocillos con la ayuda de una pipeta multicanal, agregue 50 μl de Medio Eagle Modificado (DMEM) de Dulbecco, 10% de suero fetaval bovino (FBS),....
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Divulgaciones
No se han declarado conflictos de interés.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Puntas de pipeta MultiGuard Barrier 1-20 μl | Biociencia de Sorenson | 30550T | |
| Puntas de pipeta MultiGuard Barrier 1-200 μl | Biociencia de Sorenson | 30550T | |
| NuncTM Placa de Cultivo Celular Delta Tratada en Superficie (placas estériles de 10 cm) | Thermo Fisher Scientific | 150350 | |
| Recipientes de pipeta (50 ml) | genérico | ||
| Placa blanca de 96 pocillos | Thermo FisherScientific | 136101 | |
| Celdas HEK 293T/17 | ATCC | CRL-11268 | |
| Plásmido de expresión de la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2) del receptor de entrada de la célula huésped: pCDNA3.1+-ACE2 | Simmons 2004 | ||
| Plásmido de expresión de la serina proteasa transmembrana 2 (TMPRSS2) que ceba la proteína Spike (S) del coronavirus: pCAGGS-TMPRSS2 | Bertram 2010 | ||
| Medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) con 4,5 g/L de glucosa, suplementado con un 10% de suero fetal bovino (FBS) y un 1% de penicilina/estreptomicina (P/S) | Pan-Biotecnología | P04-04510 P40-37500 P06-07100 | |
| Reactivo de transfección FuGENE® HD, 1 ml | Promega | E2311 | |
| Tripsina-EDTA (0,05%), rojo fenol | Pan-Biotecnología | P10-040100 | |
| Anticuerpo de control positivo (reactivo de investigación para el anti-SARS-CoV-2 Ab) que puede neutralizar el PV del SARS-CoV-2 (NIBSC, código: 20/162, disponible internacionalmente o HICC-pool 2/HICC pool 3) | |||
| Plasma de convaleciente humano COVID-19 para analizar | |||
| Sistema de ensayo de luciferasa Glo brillante | Promega | E2650 |
