$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado de animales y la junta de revisión veterinaria de JoVE.
1. Anestesia y cirugía animal
- Pesa y anestesia al ratón con el régimen de anestesia aprobado por el comité de cuidado de animales de tu localidad.
- Realice un pellizco en la cola o los dedos de los pies con fórceps para confirmar la anestesia profunda antes de la cirugía.
- Coloque el ratón en un aparato estereotáxico y fije su cabeza.
- Aplique ungüento para los ojos en ambos ojos para mantenerlos húmedos. Siga las pautas locales de cuidado de animales con respecto a la analgesia preoperatoria y postoperatoria.
- Afeita el vello con una maquinilla quirúrgica. Realice una pequeña incisión (12-15 mm) en el centro de la zona quirúrgica expuesta con unas tijeras. Con unas pinzas, tire suavemente del cuero cabelludo para separarlo de la línea media.
- Separe la piel suavemente y elimine el tejido residual. Limpia el cráneo con bastoncillos de algodón recubiertos de peróxido de hidrógeno.
- Taladre dos pequeños orificios de radios de 1,0-1,5 mm tanto en el lado izquierdo como en el derecho del cráneo para permitir que los microelectrodos de registro se inserten en las regiones M2 bajo un microscopio estereoscópico (Figura 1A)
nota: Localizaciones estereotáxicas de la M2 bilateral: 1,94 mm anterior al brema, 1,0 mm lateral a la línea media y 0,8-1,1 mm ventral a la duramadre.
- Retire la duramadre con cuidado con una aguja de tungsteno.
- Micropipetas de borosilicato de vidrio (diámetro exterior: 1,0 mm) como microelectrodos de registro con una resistencia de 1-2 MΩ.
- Inserte dos microelectrodos de registro separados llenos de NaCl de 0,5 M en los orificios utilizando micromanipuladores mecánicos (a 60°, Figura 1B).
2. Registros de LFP en M2 bilateral de ratones
- Baje lentamente los electrodos de vidrio izquierdo y derecho a las coordenadas apropiadas de M2 bilateral (Figura 1C).
- Para el control de calidad, pruebe la resistencia de cada electrodo utilizando el amplificador diferencial antes de capturar los LFP.
- Ajusta el proceso de grabación a 0,1 Hz de paso alto y 1.000 Hz de paso bajo con amplificación de 1.000x.
- Recopile datos brutos digitalizados de LFP de al menos 60 s de actividades espontáneas en un estado estable, con ratones respirando uniformemente a una frecuencia respiratoria de 2 respiraciones por segundo bajo anestesia.
- Después de la grabación, levante lentamente los electrodos fuera del cerebro, luego eutanasique a los ratones mediante una dislocación cervical rápida.
- Guarde los datos y analícelos sin conexión.
