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En respuesta a la infección viral, un huésped desarrolla varias respuestas de defensa, tales como la activación de las vías inmunológicas innatas de señalización que conducen a la producción de citoquinas 1,2 antiviral. Con el fin de colonizar el huésped, los virus son obligado a evadir las respuestas del huésped antivirales y manipular las vías de señalización. Desentrañar la interacción huésped-virus arrojará luz sobre el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas contra la infección viral.
Murine γHV68 está estrechamente relacionado con el sarcoma de Kaposi asociado a humano oncogénico del virus del herpes y Epsten-Barr 3,4. γHV68 infección en ratones de laboratorio proporciona un modelo de animal pequeño manejable para examinar todo el curso de las respuestas del huésped y la infección viral in vivo, que no están disponibles para los herpesvirus humanos. En este protocolo, se presenta un grupo de métodos para la caracterización fenotípica y molecular disección de componentes de sistema principal de señalización en γHV68 replic líticoación tanto in vivo como ex vivo. La disponibilidad de las cepas de ratón modificados genéticamente permite la interrogación de los papeles de las rutas de señalización de acogida durante γHV68 infección aguda in vivo. Además, fibroblastos embrionarios de ratón (MEFs) aisladas a partir de estas cepas de ratón deficientes se puede utilizar para diseccionar las funciones de estas moléculas durante γHV68 vivo ex lítico de replicación.
El uso de ensayos de biología molecular y virológicos, podemos señalar el mecanismo molecular de la interacción virus-huésped y anfitrión identificar y genes virales esenciales para la replicación viral lítica. Finalmente, un cromosoma artificial bacteriano (BAC) sistema facilita la introducción de mutaciones en el factor viral (s) que específicamente interrumpir la interacción huésped-virus. Recombinante γHV68 llevar estas mutaciones se puede utilizar para recapitular los fenotipos de γHV68 replicación lítica en MEFs deficientes en la clave de host componentes de señalización.Este protocolo ofrece una excelente estrategia para interrogar interacción huésped-patógeno en múltiples niveles de intervención in vivo y ex vivo.
Recientemente, se ha descubierto que γHV68 usurpa una vía de señalización inmune innata para promover la replicación viral lítico 5. Específicamente, γHV68 de novo infección activa la quinasa IKKβ inmune y IKKβ activada fosforila el factor de transcripción viral maestro, la replicación y transactivador (RTA), para promover la activación transcripcional viral. Al hacerlo, γHV68 eficientemente su pareja de activación transcripcional de acoger la activación inmune innata, facilitando de ese modo la transcripción y la replicación viral lítica. Este estudio proporciona un excelente ejemplo de que se puede aplicar a otros virus para interrogar a la interacción huésped-virus.