Generación de un modelo de rata de glioblastoma

Resumen

Fuente: Bolcaen, J., et. al., irradiación guiada por PET y resonancia magnética de un modelo de rata con glioblastoma utilizando un microirradiador. J. Vis. Exp. (2017)

Este video muestra el procedimiento para establecer un modelo de rata de glioblastoma mediante la inyección estereotáctica de células de glioblastoma causantes de tumores cerebrales en la corteza prefrontal.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité institucional local de cuidado animal y la junta de revisión veterinaria de JoVE.

1. Modelo de célula de rata F98 GB

Cultive las células F98 GB, obtenidas de ATCC, en monocapas utilizando el medio Eagle modificado de Dulbecco, 10% suero de ternera, 1% penicilina, 1% estreptomicina, 1% L-glutamina y 0.1% anfotericina b, y colóquelas en una incubadora de CO₂ (5% CO₂ y 37 °C).

2. Inocula las células de glioma en el cerebro de ratas hembra Fischer F344 (peso corporal 170 g).
   1. Use instrumentos estériles y use guantes estériles en todo momento.
   2. Anestesiar a las ratas inyectando una mezcla de 74 mg/kg de ketamina y 11 mg/kg de xilacina por vía intraperitoneal (IP) con una jeringa de insulina (1 mL, 29 G). Confirmar la anestesia por la ausencia de respuesta al reflejo de retirada de la extremidad. Inmovilizar a las ratas en un dispositivo estereotáctico utilizando puntos de fijación para la nariz y las orejas. Coloque un gel oftálmico de carbómero para evitar la sequedad de los ojos mientras está bajo anestesia.
   3. Afeita la rata desde el nivel de los ojos hasta la parte posterior del cráneo y desinfecta la piel con povidona yodada.
   4. Exponga el cráneo a través de una incisión en la línea media del cuero cabelludo de 2 cm, y haga un agujero de 1 mm (taladro de diamante) 2 mm posterior y 2.5 mm lateral al bregma en el hemisferio frontal derecho.
   5. Inserte una aguja de insulina guiada estereotácticamente (29 G) e inyecte 5 μL de suspensión de células (20.000 células F98 GB) de 3 mm de profundidad utilizando un controlador de bomba de microjeringa (ajustes: inyectar (I50), tasa 1 nL/s (001 SDN)).
   6. Retire la jeringa lentamente y cierre la incisión con cera de hueso. Suturar la piel y desinfectarla con povidona yodada.
   7. Estabiliza la temperatura corporal del animal después de la cirugía usando una lámpara roja. Vigile el despertar de la rata hasta que haya recuperado la conciencia suficiente para mantener el decúbito esternal. No devuelva el animal a la compañía de otros animales hasta que esté completamente recuperado. Mantener a todos los animales en condiciones ambientalmente controladas (12 h con ciclos normales de luz/oscuridad, 20-24 °C y 40-70% de humedad relativa) con comida y agua ad libitum. Asegúrese de seguir de cerca a los animales controlando su peso corporal, comida, ingesta de agua y su actividad y comportamiento normal. Utilice una dosis letal de pentobarbital sódico para sacrificar a los animales (160 mg/kg) si se observa una disminución del 20% en el peso corporal o cuando el comportamiento normal se deteriora gravemente (por ejemplo, falta de acicalamiento).

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
GB RAT model
F98 Línea celular de glioblastoma	ATCC	CRL-2397
Fischer F344/Ico crl Rats	Charles River	N/A	http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/fischer-344-rat
Micropump system	World Precision Instruments	UMP3	Micro 4: https://www.wpiinc.com/products/top-products/make-selection-ump3-ultramicropump/#tabs-1
Stereotactic frame	Kopf	902	Model 902 Dual Small Animal Stereotaxic frame
Diamond drill	Velleman	VTHD02	https://www.velleman.eu/products/view/?id=370450
Bone wax	Aesculap	1029754	https://www.aesculapusa.com/products/wound-closure/hemostatic-bone-wax
Jeringa de insulina Microfine	Beckton-Dickinson	320924	1 mL, 29G
InfraPhil IR lamp	Philips	HP3616/01
Ethilon	Ethicon	662G/662H	FS-2, 4-0, 3/8, 19 mm