Administración intravenosa de vectores de virus adenoasociados recombinantes en un modelo de rata

Resumen

Fuente: Grames, M. S., et al. Métodos y consejos para la administración intravenosa de virus adenoasociados a ratas y evaluación de la transducción del sistema nervioso central. J. Vis. Exp. (2017)

Este video demuestra la inyección en la vena de la cola del virus adenoasociado recombinante (AAV) en ratas. Después de la inyección en la vena lateral de la cola, el virus ingresa al torrente sanguíneo, circula por el corazón y llega al cerebro, donde ingresa a las neuronas y facilita la producción de proteínas objetivo para aplicaciones neuroterapéuticas.

Protocolo

Todos los procedimientos que involucran modelos animales han sido revisados por el comité de cuidado animal institucional local y la junta de revisión veterinaria JoVE.

1. Prepare el

rat

1. Suba el oxígeno a 1 L/min y ajuste la anestesia con isoflurano al 5%. Asegúrese de que la anestesia con gas fluya hacia la cámara de inducción verificando todas las mangueras de conexión y las orientaciones de la llave de paso.
2. Coloque a la rata en la cámara de inducción de anestesia con gas durante unos 3 minutos hasta que la rata no responda.
3. Asegure una profundidad adecuada de anestesia pellizcando el dedo del pie. No debe haber movimiento en el pie o la pierna después del pellizco del dedo del pie.
4. Reduzca la anestesia con isoflurano al 2% para el mantenimiento y ajuste la llave de paso para que la anestesia fluya hacia la máscara de anestesia.
5. Coloque la nariz de la rata en la máscara de anestesia y ajústela para que quede acostada de lado.
6. Identifique la vena lateral de la cola.
   NOTA: Las venas laterales de la cola se encuentran aproximadamente a las 10 y las 2 en punto, con la parte superior dorsal de la cola a las 12 en punto. Con la rata acostada de lado, la vena lateral de la cola debe estar hacia arriba.
7. Limpie el área de inyección con la almohadilla de preparación de alcohol. El sitio de inyección está a dos tercios de la longitud de la cola.

2. Inyecte el vector

1. Sostenga firmemente la cola ligeramente por encima del área de inyección con un dedo directamente sobre la vena lateral de la cola; esto dilatará la vena.
2. Con el bisel hacia arriba, alinee la aguja con la vena visible de la cola en la misma dirección.
3. Perfore la piel sobre la vena de la cola teniendo mucho cuidado de evitar que la otra mano sostenga la cola y presione la vena de la cola.
4. Libere la presión de la vena de la cola para permitir el flujo sanguíneo normal.
5. Mueva la aguja hacia la vena. Para asegurarse de que la aguja haya perforado la vena de la cola, tire ligeramente hacia atrás del émbolo. Si la aguja está en la vena, la sangre fluirá hacia la aguja.
   1. Cambia la posición de la aguja según sea necesario. Luego, para estabilizar la aguja, mueva la mano por encima del lugar de la inyección hacia debajo del lugar de la inyección y sostenga el extremo de la jeringa contra la cola.
6. Inyecte lentamente el vector en la cola (aproximadamente 20 μL / s).
   NOTA: La vena puede perder color a medida que el vector fluye a través de ella. Los signos de que la solución se inyectó fuera de la vena incluyen ampollas, blanqueamiento de la piel o resistencia al inyectar el vector. Con la práctica, se puede minimizar la exposición extravascular
.
7. Después de administrar el vector, retire la aguja de la rata y presione una gasa contra el lugar de la inyección para ayudar a detener el sangrado durante 30 a 60 segundos.

3. Limpieza

1. Apague la anestesia con isoflurano y el oxígeno. Monitoree a la rata hasta que recupere la conciencia, luego devuélvala a su jaula.

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
1-mL jeringa	BD	309626	Viene con una aguja de 25g adjunta. Reemplace con una aguja de 27-30 g para inyección
Aguja de 30 g	BD	305106
Isoflurano	Piramal Healthcare	66794-013-25	Isoflurano USP 250 mL
Mascarilla de anestesia	Kopf Instruments	906
Gasa	Henry Schein	100-2524	2" x 2" (5 cm x 5 cm)
Vaporizador de anestesia con gas	SurgiVet	4214322	T3 clásico
Eliminador de anestesia de gas	SurgiVet	32373B10	Enviro-PURE
	Sears	17280
70% Etanol	Decon Laboratories, Inc.	2401	140 prueba
70% Isopropanol	VWR	89108-160

Almohadilla térmica