Las neuronas nacidas de adultos del bulbo olfatorio puede ser controlado usando optogenetically Channelrhodopsin2 que expresan lentiviral inyección en la corriente migratoria rostral y fotoestimulación crónica con una miniatura implantado LED.
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Artículo de método
Transducción viral selectiva de adultos nacidos en las neuronas olfativas de las enfermedades crónicas En vivo Estimulación Optogenetic
En este artículo
Resumen
Resumen
Interneuronas locales se regeneran continuamente en el bulbo olfativo de los roedores adultos 1-3. En este proceso, denominado neurogénesis adulta, las células madre neurales en las paredes de los ventrículos laterales dan origen a los neuroblastos que migran de varios milímetros a lo largo de la corriente migratoria rostral (RMS) para alcanzar e incorporar en el bulbo olfatorio. Para el estudio de los diferentes pasos y el impacto de la integración de las neuronas adultas de origen en los circuitos preexistentes olfativo, es necesario etiquetar y manipular de forma selectiva la actividad de esta población específica de las neuronas. El reciente desarrollo de las tecnologías de optogenetic ofrece la oportunidad de utilizar la luz para activar precisamente este grupo específico de neuronas sin afectar a las neuronas circundantes 4,5. A continuación, presentamos una serie de procedimientos para expresar de forma viral Channelrhodopsin2 (ChR2)-YFP en una cohorte temporalmente restringido de neuroblastos en el RMS antes de llegar al bulbo olfatorio y se hacen adultos nacidos en neurons. Además, se muestra cómo se implante y calibrar una miniatura de LED para la estimulación crónica en vivo de ChR2 neuronas que expresan.
Protocolo
1. Estereotáxica inyecciones
- El virus utilizado en estos experimentos es un vector lentiviral replicación deficiente basada en el virus del VIH para expresar Channelrhodopsine2-YFP (proteína fluorescente de color amarillo) construcción de fusión controlado por un promotor sinapsina 6. El plásmido fue generosamente proporcionada por K. Deisseroth 's del grupo de investigación ( http://www.stanford.edu/group/dlab/optogenetics/index.html ). Los lentivirus se puede obtener de fuentes comerciales o producidos en el laboratorio de acuerdo a los protocolos establecidos 7.
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Discusión
Herramientas Optogenetic han aumentado recientemente el control sobre selectiva poblaciones neuronales, incluyendo los adultos las neuronas nacidas en el sistema olfativo. A continuación se describe cómo realizar una inyección estereotáxica de un vector lentiviral expresar ChR2-YFP en una población específica de los adultos nacidos en las neuronas. Controlando cuidadosamente el período post-inyección, que son capaces de analizar y manipular la actividad de una cohorte de adultos nacidos en las neuronas con una edad homo.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por la compañía de seguros de vida "Novalis-Taitbout", Escuela de Neurociencias de París (PEV), la Agence Nationale de la Recherche "ANR-09-neur-004" en el marco de la "ERA-NET NEURON" de 7PM programa por la Comisión Europea, "Fundación pour la Recherche Medicale", la Fundación Letten y la Fundación Pasteur.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Material | Empresa | Catálogo N º | |
| La ketamina | Merial | Imalgène 1000 | |
| Xilazina | Bayer Health Care | Rompum 0,2% | |
| Pipeta Extractor | Sutter | P-97 | |
| Capilares de vidrio (3,5 ") | Drummond Científico | 3-000-203-G / X | |
| Nanoject II microinyector | Drummond Científico | 3-000-204 | |
| Taladro de velocidad alta quirúrgica | Herramientas de Bellas Ciencia | 18000-17 | |
| Taladro de acero micro rebabas 0,7 mm diámetro de la punta | Herramientas de Bellas Ciencia | 19008-07 | |
| LED azul CMS 4.6 W | OSRAM | LBW5SN | |
| Conector hembra eléctrica (2,54 mm) | Fischer Elektronik | BL5.36Z | |
| Regulador de corriente de LED (max: 1A) | A1W Electronik | HKO-KL50-1000 | |
| Generador de impulsos | AMPI | Maestro-8 | |
| Medidor de potencia óptica | Thor Laboratorios | PM100 | |
| Adhesivo de cianoacrilato | Loctite | 454 | |
| Cemento de policarboxilato (primera capa de cemento) | Septodont | Selfast (# 0068Q) | |
| Metacrilato de cemento (cemento segunda capa) | GC InternationalCorp. | Unifast Trad - líquido (# 339292) Unifast Trad - Polvo (# 339114) | |
| Carprofeno | Pfizer | Rimadyl |
Referencias
- Lledo, P. M. Adult neurogenesis and functional plasticity in neuronal circuits. Nat. Rev. Neurosci. 7, 179-193 (2006).
- Alonso, M. Turning astrocytes from the rostral migratory stream into neurons: a role for the olfactory sensory organ.....
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Reimpresiones y permisos
