Modelo de ratón de la endometriosis quirúrgicamente inducida por la Auto-trasplante de tejido uterino

Summary

Una descripción de la inducción quirúrgica de la endometriosis en ratones y ratas por auto-trasplante de tejido uterino de la cascada arterial del mesenterio intestinal.

Abstract

La endometriosis es una enfermedad crónica y dolorosa, cuya etiología permanece desconocida. Además, el tratamiento de la endometriosis puede requerir la extirpación laparoscópica de lesiones y / o la gestión farmacéutica crónica del dolor y los síntomas de la infertilidad. El costo asociado con la endometriosis ha sido estimada en 22 mil millones de dólares por año en los Estados Unidos ^1. Para avanzar en nuestra comprensión de los mecanismos subyacentes a esta enigmática enfermedad, los modelos animales han sido empleados. Los primates desarrollan espontáneamente endometriosis y por lo tanto, los modelos de primates más se asemejan a la enfermedad en las mujeres. Modelos de roedores, sin embargo, son más rentables y de fácil acceso ^2. El modelo que se describe aquí implica una transferencia autóloga del tejido uterino en el mesenterio intestinal (Figura 1) y se desarrolló por primera vez en la rata ³ y luego a la del ratón ^4. El objetivo del modelo de roedores autólogo de endometriosis quirúrgicamente inducido es para imitarla enfermedad en las mujeres. Nosotros y otros han demostrado previamente que el patrón de expresión de genes alterado observado en las lesiones de endometriosis de los ratones o las ratas espejos que se observa en las mujeres con la enfermedad ^5,6. Una de las ventajas de realizar la cirugía en el ratón es que la abundancia de cepas de ratones transgénicos disponibles puede ayudar a los investigadores para determinar el papel de determinados componentes importantes en el establecimiento y crecimiento de la endometriosis. Un modelo alternativo en el que extirpar los fragmentos de endometrio humano se introducen en el peritoneo de los ratones inmunodeprimidos también es ampliamente utilizado, pero está limitada por la falta de un sistema inmune normal que se cree que es importante en la endometriosis ^2,7. Es importante destacar que el modelo de ratón de la endometriosis inducida quirúrgicamente es un modelo versátil que se ha utilizado para estudiar cómo el sistema inmune ^{8, 9,10} hormonas y los factores ambientales afectan a ^11,12 endometriosis, así como los efectos de la endometriosis en fertility ¹³ y el dolor ^14.

Protocol

1. La planificación de la cirugía de animales vivos

1. Asegúrese de que la aprobación correspondiente se ha recibido para trabajar con animales de laboratorio.
2. Para los ratones y permitir que al menos una semana de aclimatación a su nuevo entorno.
3. Los ratones hembra que encuentra en la ausencia de exposición a las feromonas masculinas pueden dejar de pedalear, un fenómeno que se conoce como el efecto Whitten ^15,16. A seguir adelante ratones transferencia empapados de orina masculina ropa a la jaula de las mujeres cada cinco días. Por otra parte, si descapotable se utilizan jaulas, colocar la jaula femenina entre dos jaulas de lo....

Discussion

Hay varios parámetros críticos que deben tenerse en cuenta al realizar la inducción quirúrgica de la endometriosis en ratones. En primer lugar, la endometriosis es una enfermedad estrógeno dependiente y, como tal, esta cirugía se debe realizar en animales intactos o, alternativamente, en los animales suplementados con ovariectomizadas estrógenos ^20. En segundo lugar, la sutura de la biopsia endometrial a la cascada arterial debe realizarse con extremo cuidado. Hemos encontrado que el uso de sólo dos nudos rel.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nombre del reactivo / equipo	Empresa	Número de catálogo
Cera lápiz	Pescador	NC9954135
Portaobjetos de vidrio	Pescador	12-550-433
Cuentagotas	Pescador	S79383
Microscopio de luz estándar para la evaluación de frotis de citología vaginal
La buprenorfina HCL c3 (CarJet) 10X1ml	Animal mayordomo de la Salud de suministro	022891
Fosfato estéril (PBS)	Gibco	14040-117
10.000 U / ml de penicilina, 10000 mg / ml de estreptomicina en el 0,85% de NaCl	Hyclone	SV30010
Isoflurano	AbbottSanidad Animal	05260-05
El isoflurano no reinhalación anestesia sistema
Recirculación de agua caliente almohadilla eléctrica
30 ml jeringa vaina	Pescador	14 a 823-16G
Polvo estéril guantes sin	Fisherbrand	19020558
Oftálmicos pomada	Productos farmacéuticos importantes	10033691
Pequeñas tijeras eléctricas	Wahl	9861-600
Clorhexidina matorral	Pescador	NC9863042
70% de etanol
Campo estéril Polylined	Busse Desechables hospital	696
Tamaño 3 bisturí	Pescador	22-079-657
Número 10 hojas de bisturí	Pescador	22-079-681
Pequeñas tijeras quirúrgicas	Roboz	RS-5850
Pequeña sierra semi-curva con fórceps	Roboz	RS-5135
5-0 negro trenzado de sutura de seda	Ethicon	K870H
Esterilizados cristal pyrex Petri	Corning	70160-101
2 mm de biopsia por punción	Miltex	33-31
Una gasa estéril	Kendall	1806
6-0 ETHILON * negro sutura monofilamento de nylon	Ethicon	697G
Portaagujas (opcional)	Mundial de Instrumentos de Precisión	500023
5-0 teñir trenzado recubierto vicryl sutura	Ethicon	J490G
9mm autoclip herida clips	Becton Dickinson	427631
Autoclip aplicador y removedor	Becton Dickinson	427630
23G aguja	Becton Dickinson	305193
1cc jeringa	Becton Dickinson	301025
Aumento 5X soporte de vidrio (opcional)	Pescador	14-648-23
10% de formol	Pescador	SF100-4
Calibrador	Roboz	RS-6466
Procesamiento / incrustación cassettes	Pescador	15 a 197-700A
Biopsia de almohadillas de espuma	Pescador	22-038-222
RNAqueous ARN Kit de aislamiento	Ambion	AM1912
Nitrógeno líquido
Ajustar tapa del tubo de microcentrífuga de la parte superior plana	Pescador	02-681-240
La ketamina (opcional)	Simga	K4138
Domitor (medetomidina clorhidrato) (opcional)	Tocris	2023
Antisedan (atipamezol) (opcional)	Sigma	A9611