Una descripción de la inducción quirúrgica de la endometriosis en ratones y ratas por auto-trasplante de tejido uterino de la cascada arterial del mesenterio intestinal.
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Artículo de método
Modelo de ratón de la endometriosis quirúrgicamente inducida por la Auto-trasplante de tejido uterino
En este artículo
Resumen
Resumen
La endometriosis es una enfermedad crónica y dolorosa, cuya etiología permanece desconocida. Además, el tratamiento de la endometriosis puede requerir la extirpación laparoscópica de lesiones y / o la gestión farmacéutica crónica del dolor y los síntomas de la infertilidad. El costo asociado con la endometriosis ha sido estimada en 22 mil millones de dólares por año en los Estados Unidos 1. Para avanzar en nuestra comprensión de los mecanismos subyacentes a esta enigmática enfermedad, los modelos animales han sido empleados. Los primates desarrollan espontáneamente endometriosis y por lo tanto, los modelos de primates más se asemejan a la enfermedad en las mujeres. Modelos de roedores, sin embargo, son más rentables y de fácil acceso 2. El modelo que se describe aquí implica una transferencia autóloga del tejido uterino en el mesenterio intestinal (Figura 1) y se desarrolló por primera vez en la rata 3 y luego a la del ratón 4. El objetivo del modelo de roedores autólogo de endometriosis quirúrgicamente inducido es para imitarla enfermedad en las mujeres. Nosotros y otros han demostrado previamente que el patrón de expresión de genes alterado observado en las lesiones de endometriosis de los ratones o las ratas espejos que se observa en las mujeres con la enfermedad 5,6. Una de las ventajas de realizar la cirugía en el ratón es que la abundancia de cepas de ratones transgénicos disponibles puede ayudar a los investigadores para determinar el papel de determinados componentes importantes en el establecimiento y crecimiento de la endometriosis. Un modelo alternativo en el que extirpar los fragmentos de endometrio humano se introducen en el peritoneo de los ratones inmunodeprimidos también es ampliamente utilizado, pero está limitada por la falta de un sistema inmune normal que se cree que es importante en la endometriosis 2,7. Es importante destacar que el modelo de ratón de la endometriosis inducida quirúrgicamente es un modelo versátil que se ha utilizado para estudiar cómo el sistema inmune 8, 9,10 hormonas y los factores ambientales afectan a 11,12 endometriosis, así como los efectos de la endometriosis en fertility 13 y el dolor 14.
Protocolo
1. La planificación de la cirugía de animales vivos
- Asegúrese de que la aprobación correspondiente se ha recibido para trabajar con animales de laboratorio.
- Para los ratones y permitir que al menos una semana de aclimatación a su nuevo entorno.
- Los ratones hembra que encuentra en la ausencia de exposición a las feromonas masculinas pueden dejar de pedalear, un fenómeno que se conoce como el efecto Whitten 15,16. A seguir adelante ratones transferencia empapados de orina masculina ropa a la jaula de las mujeres cada cinco días. Por otra parte, si descapotable se utilizan jaulas, colocar la jaula femenina entre dos jaulas de lo....
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Discusión
Hay varios parámetros críticos que deben tenerse en cuenta al realizar la inducción quirúrgica de la endometriosis en ratones. En primer lugar, la endometriosis es una enfermedad estrógeno dependiente y, como tal, esta cirugía se debe realizar en animales intactos o, alternativamente, en los animales suplementados con ovariectomizadas estrógenos 20. En segundo lugar, la sutura de la biopsia endometrial a la cascada arterial debe realizarse con extremo cuidado. Hemos encontrado que el uso de sólo dos nudos rel.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Un agradecimiento especial a Chris Kassotis y Audrey Bailey para la revisión crítica de este manuscrito y al Dr. Scott Korte, Beeman Joseph, Curfman Alison, Kimball Pablo, Neibreggue Bridget, Redel Jacob, Schröder Amy, Steinberg Maija y Winkeler Stacey por su ayuda en la optimización de de este modelo en nuestro laboratorio. El financiamiento fue proporcionado por la capacitación clínica Biodetectives Grant (NIH T90) (KEP) de la Universidad de Missouri Ciencias de la Vida Programa de Licenciatura de Investigación de Oportunidades, MU Consejo de Investigación, Becas de investigación MU Junta y los NIH R21HD056441 (SCN).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo / equipo | Empresa | Número de catálogo | |
| Cera lápiz | Pescador | NC9954135 | |
| Portaobjetos de vidrio | Pescador | 12-550-433 | |
| Cuentagotas | Pescador | S79383 | |
| Microscopio de luz estándar para la evaluación de frotis de citología vaginal | |||
| La buprenorfina HCL c3 (CarJet) 10X1ml | Animal mayordomo de la Salud de suministro | 022891 | |
| Fosfato estéril (PBS) | Gibco | 14040-117 | |
| 10.000 U / ml de penicilina, 10000 mg / ml de estreptomicina en el 0,85% de NaCl | Hyclone | SV30010 | |
| Isoflurano | AbbottSanidad Animal | 05260-05 | |
| El isoflurano no reinhalación anestesia sistema | |||
| Recirculación de agua caliente almohadilla eléctrica | |||
| 30 ml jeringa vaina | Pescador | 14 a 823-16G | |
| Polvo estéril guantes sin | Fisherbrand | 19020558 | |
| Oftálmicos pomada | Productos farmacéuticos importantes | 10033691 | |
| Pequeñas tijeras eléctricas | Wahl | 9861-600 | |
| Clorhexidina matorral | Pescador | NC9863042 | |
| 70% de etanol | |||
| Campo estéril Polylined | Busse Desechables hospital | 696 | |
| Tamaño 3 bisturí | Pescador | 22-079-657 | |
| Número 10 hojas de bisturí | Pescador | 22-079-681 | |
| Pequeñas tijeras quirúrgicas | Roboz | RS-5850 | |
| Pequeña sierra semi-curva con fórceps | Roboz | RS-5135 | |
| 5-0 negro trenzado de sutura de seda | Ethicon | K870H | |
| Esterilizados cristal pyrex Petri | Corning | 70160-101 | |
| 2 mm de biopsia por punción | Miltex | 33-31 | |
| Una gasa estéril | Kendall | 1806 | |
| 6-0 ETHILON * negro sutura monofilamento de nylon | Ethicon | 697G | |
| Portaagujas (opcional) | Mundial de Instrumentos de Precisión | 500023 | |
| 5-0 teñir trenzado recubierto vicryl sutura | Ethicon | J490G | |
| 9mm autoclip herida clips | Becton Dickinson | 427631 | |
| Autoclip aplicador y removedor | Becton Dickinson | 427630 | |
| 23G aguja | Becton Dickinson | 305193 | |
| 1cc jeringa | Becton Dickinson | 301025 | |
| Aumento 5X soporte de vidrio (opcional) | Pescador | 14-648-23 | |
| 10% de formol | Pescador | SF100-4 | |
| Calibrador | Roboz | RS-6466 | |
| Procesamiento / incrustación cassettes | Pescador | 15 a 197-700A | |
| Biopsia de almohadillas de espuma | Pescador | 22-038-222 | |
| RNAqueous ARN Kit de aislamiento | Ambion | AM1912 | |
| Nitrógeno líquido | |||
| Ajustar tapa del tubo de microcentrífuga de la parte superior plana | Pescador | 02-681-240 | |
| La ketamina (opcional) | Simga | K4138 | |
| Domitor (medetomidina clorhidrato) (opcional) | Tocris | 2023 | |
| Antisedan (atipamezol) (opcional) | Sigma | A9611 |
Referencias
- Simoens, S., Hummelshoj, L., D'Hooghe, T. Endometriosis: cost estimates and methodological perspective. Hum. Reprod. Update. 13, 395-404 (2007).
- Grummer, R. Animal models in endometriosis research. Hum. Reprod. Update. 12, 641-649 (2006).
- Vernon, M. W., Wilson, E....
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