Combinación de radioterapia en un modelo ortotópico de tumor cerebral del ratón

Resumen

El propósito de este artículo es describir el uso de un modelo ortotópico de glioblastoma para los estudios de quimiorradioterapia. En este artículo se irá si el procesamiento de células, la implantación, y la radioterapia del ratón usando un modelo intracraneal.

Resumen

El glioblastoma multiforme (GBM) son los más comunes y agresivos tumores cerebrales en adultos de primaria ^1. En los últimos años ha habido un progreso sustancial en la comprensión de los mecanismos de invasión tumoral y la inoculación directa de un tumor intracerebral ofrece la oportunidad de observar el proceso invasivo en un entorno fisiológico de ^2. En cuanto a los tumores del cerebro humano se refiere, los modelos disponibles en la actualidad ortotópico se establecen, ya sea por inyección estereotáxica de suspensiones celulares o el implante de una pieza sólida de tumor a través de un procedimiento de craneotomía complicada ^3. En nuestra técnica se cosechan las células de cultivo de tejidos para crear una suspensión celular utilizada para implantar directamente en el cerebro. La duración de la cirugía es de aproximadamente 30 minutos, y como el ratón tiene que estar en un plano quirúrgico constante, un anestésico inyectable que se usa. El ratón se coloca en una plantilla estereotáxica hecha por Stoetling (figura 1). En popaer el área quirúrgica se limpia y se prepara, se hace una incisión; y el bregma está localizado para determinar la ubicación de la craneotomía. La localización de la craneotomía es de 2 mm a la derecha y 1 mm rostral al bregma. La profundidad es de 3 mm de la superficie del cráneo, y las células se inyectan a un ritmo de 2 l cada 2 minutos. La piel se sutura con 5-0 PDS, y el ratón se le permite despertar en una almohadilla térmica. Desde nuestra experiencia, en función de la línea celular, el tratamiento puede llevarse a cabo de 7-10 días después de la cirugía. Entrega fármaco depende de la composición del fármaco. Para el tratamiento de radiación que los ratones se anestesiaron, y poner en una plantilla de encargo. El plomo cubre el cuerpo del ratón y expone sólo el cerebro del ratón. El estudio de la tumorigénesis y la evaluación de nuevas terapias para MBG requieren exactos y reproducibles cerebrales modelos animales de tumores. Así que utilizamos este modelo ortotópico del cerebro para estudiar la interacción del microambiente del cerebro y el tumor, para comprobar la EFICACIAceso de diferentes agentes terapéuticos con o sin radiación.

Protocolo

I. Preparación de la célula

1. Las células se crecieron hasta confluencia en DMEM con FBS al 10% sobre un 80% confluente 225 cm ³ matraz por cada 5 ratones para ser implantados.
2. Aspirar medios fuera de las células; lavar con 10 ml de PBS sin calcio o magnesio. Aspirar PBS fuera de las células.
3. Trypsinize células con 3 ml de tripsina, esperar 10-15 min, y neutralizar la tripsina con 15 ml de medio.
4. Pipetee todas las células y los medios en un cónico de 50 ml. Dos matraces grandes encajar en un cónico de 50 ml.
5. Girar las células a 1600 rpm durante 7 min a 4 ° C. Totalmente aspirar sobrenadante. Resuspender las ....

Discusión

Los gliomas malignos, tales como el glioblastoma multiforme, representan los tumores cerebrales primarios más comunes y tienen un pronóstico sombrío ^4. La supervivencia de los pacientes afectados por el GBM se ha mantenido prácticamente sin cambios durante la última década (es decir, 9-12 meses después del diagnóstico) a pesar de los avances en la cirugía, la radioterapia y la quimioterapia ^5. Las características de un modelo apropiado para el estudio del tratamiento del glioma debe incluir una loc.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Estándar de laboratorio estereotáxica Instrutment	Stoelting mouse y el adaptador de rata
Betadine	100% de EtOH
70% de EtOH	50% de acetona
6 "Q-tips	Torundas con alcohol
Hamilton jeringa de 80008	Ethicon 5-0 PD
1701 SN 31-33G / 1 "/ aguja PT3	1 ml jeringas
Agujas 25G	Almohadilla eléctrica
Las lágrimas artificiales Ungüento	Muy buen marcador permanente de punta