Nuestro protocolo se muestra cómo se vierta geles múltiples proteínas a la vez de reciclaje de Invitrogen casetes NuPAGE Novex minigel, y materiales baratos comprados en una tienda de mejoras para el hogar. Este método económico y eficiente incluye una forma de almacenar los geles a 4 ° C durante unas pocas semanas. Al reutilizar los cartuchos de gel de plástico de los geles disponibles en el mercado, los laboratorios que se ejecutan frecuentes geles de proteínas puede ahorrar costos significativos y ayudar al medio ambiente.
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Artículo de método
Verter y ejecución de un gel de proteínas mediante la reutilización de casetes comerciales
En este artículo
Resumen
Resumen
La evaluación de las proteínas utilizando poliacrilamida dodecilsulfato de sodio electroforesis en gel (SDS-PAGE) análisis es una técnica común utilizada por los investigadores bioquímica y biología molecular 1-4. Para los laboratorios que realizan análisis diarios de proteínas, el costo de geles de poliacrilamida comercialmente disponibles (~ $ 10/gel) puede ser considerable en el tiempo. Para mitigar este costo, algunos investigadores preparan sus propios geles de poliacrilamida. Los métodos tradicionales de verter estos geles suelen utilizar equipo especializado y placas de vidrio de gel que puede ser costoso y evitar verter muchos geles y su almacenamiento para uso futuro. Por otra parte, la manipulación de placas de vidrio durante la limpieza o el gel vertiendo puede resultar en la rotura accidental de crear un peligro de seguridad, lo que puede impedir su uso en las clases de laboratorio de grado. Nuestro protocolo se muestra cómo se vierta geles múltiples proteínas simultáneamente por reciclaje de cartuchos de Invitrogen NuPAGE Novex minigel, y barato materiales comprado en una tienda de mejoras para el hogar. Este método económico y eficiente incluye una forma de almacenar los geles a 4 ° C durante unas pocas semanas. Al reutilizar los cartuchos de gel de plástico de los geles disponibles en el mercado, los laboratorios que se ejecutan frecuentes geles de proteínas puede ahorrar costos significativos y ayudar al medio ambiente. Además, las cintas de plástico de gel son extremadamente resistentes a la rotura, lo que los hace ideales para aulas de laboratorio de grado.
Protocolo
1. Preparación de los casetes
- Limpie la parte delantera y trasera de las placas de un cassette de utilizar Invitrogen NuPAGE Novex minigel, o cassette otra minigel comercial.
- Preparar ml aproximadamente 1-3 de epoxi de plástico y mezclar bien de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
- Aplicar el epoxi hasta el borde interior de la placa frontal, donde las dos placas entrarán en contacto cuando la casete está montado.
- Deslice un trozo de papel de filtro o de cartón a través de la rendija inferior de la placa posterior, cuando el montaje de la casete para evitar exceso de epoxi de sellar la abertura. Quitar el papel de fil....
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Discusión
La electroforesis de proteínas en gel es un método indispensable para los laboratorios de biología molecular mayor. Minigeles comercialmente disponibles proporcionan un alto nivel de comodidad, pero puede ser costoso. Aquí te mostramos cómo volver a utilizar los casetes MiniGel de una popular marca de minigeles disponibles en el mercado. Este método conserva la conveniencia de tener una fuente ya preparada de geles, pero a una fracción del coste de minigeles comercialmente disponibles. Una etapa clave en este procedimie.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Los autores agradecen al Instituto Médico Howard Hughes de una Ciencia de UF para el premio de la vida a AH
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre de reactivo | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
| Invitrogen NuPAGE Novex minigel cassette (1,0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Disponible en 2, 5, 10, 12, 15 y pozos 2D |
| Epoxi de plástico | Loctite | 108771 | |
| Cinta eléctrica | Escocés | ||
| 125 ml de lado el brazo frasco | Pirex | 5360 | |
| 4X Tris-Base de gel de resolución de búfer | 1,5 M de Tris-base de pH 8,7 | ||
| acrilamida | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrilamida | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30,8% de acrilamida solución | 30:0.8 acrilamida: bis-acrilamida en GRI-H 2 O | ||
| 10% de APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0,1 g de persulfato de amonio en 1 ml de O GRI-H 2, preparada inmediatamente antes de usar |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturado con tampón 1X gel de resolución | 05:02 1-butanol a 1X Resolución de tampón de gel | ||
| 4X Tris-base de gel de apilamiento de amortiguación | 1,5 M de Tris-base de pH 6,8 | ||
| Gel de peine | Invitrogen | NC3015 | 15 Pues bien, 1.0 mm de espesor |
| Impulse Sealer | TEW Equipos Eléctricos Calefacción | ||
| Bolsa termosellable | Kapak / Scotchpak | 1 pinta de tamaño (6,5 "x 8") | |
| Gel buffer de almacenamiento | 1X tampón de gel de apilamiento con azida sódica 0,1% | ||
| Novex SDS Tris-Glicina tampón de muestra (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| TDT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine funcionamiento de amortiguación | Invitrogen | LC2675 | 1 litro de acciones 10 veces más: 29.0 g de Tris-Base, 144,0 g de glicina, 10,0 g de SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel de cuchillo | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
Referencias
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
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Reimpresiones y permisos
