Proteínas de alto rendimiento del generador de expresiones utilizando una plataforma de microfluidos

Summary

Se presenta un enfoque de microfluidos para la expresión de matrices de proteínas. El dispositivo consiste en miles de cámaras de reacción controladas por micro-mecánicos válvulas. El dispositivo microfluídico está acoplado a una biblioteca de genes de microarrays-impreso. Estos genes se transcribe y se traduce en un chip, lo que resulta en una matriz de proteína listo para su uso experimental.

Abstract

Campos en rápido crecimiento, tales como la biología de sistemas, requieren el desarrollo y la implementación de nuevas tecnologías, lo que permite mediciones de alto rendimiento y alta fidelidad de los grandes sistemas. Microfluídica se compromete a cumplir muchos de estos requisitos, tales como la realización de experimentos de alto rendimiento de cribado en el chip, que abarca ensayos bioquímicos, biofísicos y basados ​​en ^células-1. Desde los primeros días de los dispositivos de microfluidos, este campo ha evolucionado drásticamente, lo que lleva al desarrollo de microfluidos integración a gran escala ^2,3. Esta tecnología permite la integración de miles de válvulas micromecánicos en un único dispositivo con una huella de franqueo de tamaño (Figura 1). Hemos desarrollado una plataforma microfluídica de alto rendimiento para la generación de la expresión in vitro de matrices de proteínas (Figura 2) con nombre PING (interacción proteína Generador de red). Estas matrices pueden servir como una plantilla para muchos experimentostales como la proteína-proteína ^4, proteína-ARN ⁵ o proteína de ADN ⁶ interacciones.

El dispositivo consiste de miles de cámaras de reacción, que están programados individualmente utilizando una microarrayer. Alineación de estos microarrays impresos a los dispositivos de microfluidos programas de cada cámara con una sola mancha eliminación de la contaminación potencial de reactividad cruzada o más, para generar micromatrices utilizando técnicas estándar de microarrays manchado es también muy modular, lo que permite la arraying de proteínas, ADN ^{7 8,} moléculas pequeñas, e incluso suspensiones coloidales. El impacto potencial de la microfluídica en las ciencias biológicas es importante. Una serie de ensayos basados ​​en microfluídica ya han proporcionado nuevos conocimientos sobre la estructura y función de los sistemas biológicos, y el campo de la microfluídica, seguirá afectando la biología.

Protocol

1. Fabricación de los dispositivos

1. Comprado DTPA-D SU-8 molde de control y SPR220-7 flujo molde de la fundición de Stanford microfluídica ( www.stanford.edu / grupo / fundición ).
2. Exponer los moldes de silicona a clorotrimetilsilano (TMCS) de vapor durante 10 min para promover la liberación de elastómero después de los pasos de cocción ^9.
3. Preparar una mezcla de elastómero a base de silicona y agente de curado (mezclar bien) en dos proporciones distintas 5:1 y 20:1 para el control y moldes de flujo, respectivamente. Las diferentes relaciones son necesarias par....

Discussion

En este trabajo se presenta un método para la generación de matrices de proteínas de alto rendimiento mediante una plataforma de microfluidos. La generación de matriz se basa en la impresión de microarrays de plantillas de ADN y en la expresión de proteínas in vitro a partir del ADN dentro del dispositivo de microfluidos.

Nuestra plataforma de microfluidos novela tiene varias ventajas importantes sobre los métodos actualmente utilizados, que lo convierten en una herramienta.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reactivo / Equipo	Empresa	Número de catálogo
PDMS-SYLGARD 184	Dow Corning EE.UU.	ESSEX-DC
Clorotrimetilsilano (TMCS	Sigma-Aldrich	C72854
Sustratos de vidrio recubiertos con epoxi	CEL Asociados EE.UU.	VEPO-25C
Poli etilen glicol (PEG)	Sigma-Aldrich	81260
D-trehalosa dihidrato	Sigma-Aldrich	T9531
Biotinilado-BSA	Atravesar	PIR-29130
Neutravidina	Atravesar	31050
penta-His-biotina	Qiagen	34440
Hepes	Biological Industries	03-025-1B
TNT-T7	Promega	L5540
C-myc anticuerpo Cy3	Sigma-Aldrich
Caja de control	Stanford microfluídica Foundry
Molde	Stanford microfluídica Foundry
Pin	Nueva Inglaterra pequeños tubos Corporación
Tygon microbore tubería	Tygon	S-54-HL
Microarrayer	Bio Robótica	MicroGrid 610
Pins de silicona	Paralelo Syntesis	SMT-S75