Aislamiento de células T CD4 + de los ganglios linfáticos del ratón utilizando Miltenyi Purificación MACS

Resumen

Aislamiento de linfocitos utilizando el kit de Miltenyi MAC es una manera confiable para purificar las células de todo homogeneizados de tejido linfoide. Células purificadas utilizando el sistema de Miltenyi suelen ser ≥ 96% de pureza. Este sentido, demuestran las medidas adoptadas para aislar las células CD4 + T, uno de los kits que se ofrecen por Miltenyi.

Resumen

Aislamiento de las células de la fuente primaria es un paso necesario en muchos protocolos más complejos. Miltenyi ofrece kits para aislar las células de varios organismos incluyendo los humanos, primates no humanos, ratas y, como se describe aquí ratones. Con bolas magnéticas basadas en la separación de células permite, ya sea para la selección positiva (o agotamiento de las células), así como la selección negativa. Este sentido, demuestran la selección negativa de CD4 he tocado ni na + células T colaboradoras. El uso de este protocolo estándar que suele purificar las células que son CD4 ≥ 96% puro + / CD3 +. Este protocolo se utiliza en conjunción con el protocolo de disección y 2-Photon imagen de los ganglios linfáticos periféricos en ratones publicado en el número 7 de Jove, para la purificación de las células T y otros tipos de células para la transferencia adoptiva con fines de imagen. A pesar de que no demostró el análisis FACS en este video de protocolo, se recomienda comprobar la pureza total de células aisladas con los anticuerpos apropiados a través de la FACS. Además, se demuestra que el método no estéril de aislamiento de células T. Si las células estériles son necesarios para su particular aplicación de usuario final, asegúrese de hacer todos los procedimientos se demuestra en la capilla de cultivo de tejidos en condiciones estándar de estéril. Gracias por su atención y buena suerte con tus propios experimentos!

Protocolo

Por favor, lea y siga el protocolo incluido en el kit de Miltenyi o en línea en http://www.miltenyibiotec.com/ .

Discusión

Aislamiento de las células de la fuente primaria es un paso necesario en muchos protocolos más complejos. Miltenyi ofrece kits para aislar las células de varios organismos incluyendo los humanos, primates no humanos, ratas y, como se describe aquí ratones. Con bolas magnéticas basadas en la separación de células permite, ya sea para la selección positiva (o agotamiento de las células), así como la selección negativa. Este sentido, demuestran la selección negativa de CD4 he tocado ni na + células T colaboradoras. El uso de este protocolo est...

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Tampón MACS	Reactivo	Ninguno	Ninguno	Preparar según lo descrito por Miltenyi.
Kit de Aislamiento de Células T CD4+: Aislamiento No Tocado	Reactivo	Miltenyi Biotec	130-090-860	Para uso con el sistema Miltenyi.
Solución Salina Tamponada con Fosfato (PBS) estéril	Reactivo			Para uso en la preparación del tampón MACS.
Placa de Cultivo de 35 mm de Corning sin Tratamiento TC	Otro	Corning	430588	Utilizado en la preparación de una suspensión de células individuales.
Filtro para Células de 70 micrones	Herramienta	BD Biosciences	352350	Utilizado en la preparación de una suspensión de células individuales.
Jeringa de 6 mL	Herramienta	Tyco Healthcare, Covidien	8881516051	Utilizado en la preparación de una suspensión de células individuales.
Solución Salina Tamponada con Fosfato de Dulbecco’s al 10x (DPBS)	Reactivo	Invitrogen	14200-075	Para uso en la lisis de GR.
Agua estéril	Reactivo	Sigma-Aldrich	W4502	Para uso en la lisis de GR.